高血糖激素(CHH)在對(duì)蝦滲透調(diào)節(jié)和血糖代謝中調(diào)控機(jī)制的初步研究.pdf

1、甲殼動(dòng)物的滲透調(diào)節(jié)是維持甲殼動(dòng)物正常生命活動(dòng)的一項(xiàng)重要的生理功能,對(duì)甲殼動(dòng)物滲透調(diào)節(jié)生理的研究也一直是國(guó)內(nèi)外的熱點(diǎn)。目前對(duì)甲殼動(dòng)物滲透調(diào)節(jié)的研究也取得了一些階段性的成果,但對(duì)甲殼動(dòng)物滲透調(diào)節(jié)機(jī)制的深入研究還比較少,尤其是在神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)調(diào)控下甲殼動(dòng)物滲透調(diào)節(jié)中相關(guān)通路因子的變化的研究更少。而凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)是當(dāng)今世界養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的三大蝦類(lèi)之一,又是我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量中占總產(chǎn)量比例最高的品種。它具有很多

2、養(yǎng)殖優(yōu)勢(shì),主要有生長(zhǎng)速度較快、能夠適應(yīng)高密度的養(yǎng)殖模式、適鹽范圍較廣、能夠在較低鹽度的養(yǎng)殖水中生長(zhǎng)、對(duì)飼料的蛋白質(zhì)含量要求較低等。所以本文選擇凡納濱對(duì)蝦作為研究對(duì)象,研究了凡納濱對(duì)蝦在甲殼動(dòng)物高血糖激素(CHH)調(diào)控下相關(guān)滲透指標(biāo)的變化,初步探討了神經(jīng)內(nèi)分泌激素在凡納濱對(duì)蝦滲透調(diào)節(jié)中的作用以及通過(guò)通路中相關(guān)因子的變化來(lái)初步闡明這一機(jī)制。
　　 1、凡納濱對(duì)蝦高血糖激素(CHH)基因的克隆與序列分析
　　 甲殼動(dòng)物高血糖激

3、素對(duì)于甲殼動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育生殖等生理生化過(guò)程具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)相近物種CHH氨基酸序列的同源性比對(duì),根據(jù)保守氨基酸序列設(shè)計(jì)兼并引物,利用RT-PCR技術(shù)成功克隆了凡納濱對(duì)蝦CHH的部分核心cDNA序列。將凡納濱對(duì)蝦的CHH與其它物種的CHH進(jìn)行同源性比較發(fā)現(xiàn),CHH基因具有高度保守性,同屬于對(duì)蝦屬中的CHH基因比較相似,聚于進(jìn)化樹(shù)一個(gè)分支上。通過(guò)CHH的組織特異性研究發(fā)現(xiàn),CHH基因在腹神經(jīng),眼柄,心臟、肝胰臟和肌肉中有表達(dá),肌肉中

4、的表達(dá)量相對(duì)較低,而在鰓中沒(méi)有表達(dá)。
　　 2、切除眼柄對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓絲離子調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響
　　 本實(shí)驗(yàn)研究了切除眼柄48h對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓絲離子調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中鰓絲三種生物胺、鰓絲cAMP和cGMP以及鰓絲三種離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶活力的變化。結(jié)果顯示,切除眼柄對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓絲3種生物胺含量、cGMP含量和三種離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶血淋巴DA含量呈下降趨勢(shì),48h時(shí)顯著低于對(duì)照組(p<0.05)；切眼組NE含量在48h內(nèi)呈峰值變化,于

5、12h時(shí)達(dá)到最小值,48h時(shí)顯著高于對(duì)照組(p<0.05),切眼組5-HT含量在48h內(nèi)呈平穩(wěn)變化的趨勢(shì),48h時(shí)與對(duì)照組無(wú)顯著差異(p>0.05)；交并組DA、NE含量在實(shí)驗(yàn)時(shí)間時(shí)內(nèi)呈逐漸下降趨勢(shì),48h時(shí)顯著低于對(duì)照組水平(p<0.05)；交并組5-HT含量呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì),48h時(shí)恢復(fù)至對(duì)照組水平。切眼組cAMP含量48h內(nèi)呈現(xiàn)峰值變化,12h時(shí)達(dá)到最低值后逐漸上升,48h時(shí)恢復(fù)至對(duì)照組水平,切眼組cGMP含量呈下降趨勢(shì),2

6、4h時(shí)達(dá)到最低值后逐漸穩(wěn)定,48h時(shí)顯著低于對(duì)照組水平(p<0.05)；交并組cAMP、cGMP含量在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈峰值變化,于12h時(shí)達(dá)到最低值,然后呈上升趨勢(shì),CAMP含量24h后趨于穩(wěn)定,48h后顯著低于對(duì)照組水平(p<0.05),cGMP含量48h后恢復(fù)至對(duì)照組水平。饑餓組葡萄糖含量在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈下降趨勢(shì),48h后與對(duì)照組差異顯著(p<0.05)；切眼組葡萄糖含量在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈峰值變化,于24h時(shí)達(dá)到最低值后升高,48h時(shí)顯著高于

7、對(duì)照組水平(p<0.05)；交并組葡萄糖含量在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈下降趨勢(shì),48h時(shí)顯著低于對(duì)照組水平(p<0.05),并趨近于0。本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明,切除眼柄(CHH)后對(duì)凡納濱對(duì)蝦的血糖代謝有顯著的影響,在不切除眼柄的處理組中,饑餓組的血淋巴生物胺含量和血糖含量都低于對(duì)照組,而cAMP和cGMP含量稍高于對(duì)照組,在切除眼柄的處理組中,切眼組的各項(xiàng)指標(biāo)均高于交并組,這說(shuō)明饑餓能夠刺激細(xì)胞中的第二信使,通過(guò)傳遞相應(yīng)的信號(hào)來(lái)調(diào)控相關(guān)的控制血淋巴葡萄糖含量