彭州地區(qū)部分牡丹品種的AFLP研究.pdf

1、牡丹為異花授粉植物，自交結實率很低，這一特性為人工選擇和自然選擇提供了豐富的變異來源。經(jīng)過長期的馴化栽培，不僅形成了類型多樣的品種，而且品種間的親緣關系也較為復雜。因此在遺傳上進行分類鑒定和親緣關系的探討不僅對揭示物種的演化有重要意義，而且有利于指導牡丹新品種選育及傳統(tǒng)品種的保護等工作。
　　 本實驗采用AFLP(Amplified Fragment Length PolymorpHism)技術對28個牡丹品種進行分子水平的親緣

2、關系及遺傳多樣性研究。首先采用改良的CTAB法從牡丹幼葉中提取到了高質(zhì)量的基因組DNA，用于AFLP的雙酶切，酶切完全；然后對牡丹AFLP選擇性擴增體系進行優(yōu)化，建立最佳反應體系，篩選出適合牡丹AFLP分析的引物組合進行擴增。最后，對樣品的AFLP圖譜及數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，結果如下：
　　 1.本實驗采用改良的CTAB法從牡丹幼葉中提取基因組DNA，產(chǎn)率很高，OD260/OD280為1.8～2.0之間；經(jīng)過去RNA處理后，用瓊脂糖

3、凝膠電泳檢測，主帶清晰、DNA純度高、沒有降解、不含酶反應抑制劑，可被MseI和EcoRI兩種限制性內(nèi)切酶完全消化。
　　 2.對牡丹酶切及選擇性擴增體系進行優(yōu)化，獲得了最佳反應體系，酶切時最適溫度為37℃，限制性內(nèi)切酶用量為3U，酶切時間為3h;選擇性擴增最優(yōu)體系為：預擴增產(chǎn)物2μl，E-primer0.5μ1，M-primer0.5μl，Taq酶0.25μl，MgCl21.2μl, dNTPs1.6μl,10×Buffer2

4、μl, ddH2O11.95μl。
　　 3.采用優(yōu)化后體系，對64對AFLP引物組合進行篩選，經(jīng)過3次重復，篩選出了6對擴增條帶多、多態(tài)性高的引物組合。
　　 4.利用篩選出的6對選擇性擴增引物組合，對28個牡丹品種進行了AFLP研究。6對引物共擴增出譜帶2562條（100～750bp之間），其中2142條具有多態(tài)性，占83.61％。多態(tài)性譜帶最多的組合為E-AAC/M-CTA(88.19％)，最低的為E-AAC/M-