彭州地區(qū)部分牡丹品種的遺傳多樣性及親緣關(guān)系的RAPD研究.pdf

1、牡丹在長期的進化和栽培歷史中，由于本身的變異、自然雜交、栽培環(huán)境不同等形成了不同的品種類型，使得牡丹的分類鑒定難度加大。本試驗以彭州地區(qū)種植的部分栽培品種為材料，應(yīng)用RAPD分子標記技術(shù)，對39個牡丹品種的遺傳多樣性進行了隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)研究，通過NTSYSpc(2.10版)軟件對RAPD的擴增譜帶進行分析，進行牡丹品種的分子鑒定，探討牡丹品種之間的親緣關(guān)系。其主要的試驗結(jié)果如下：
　　 (1)采用改進的CATB

2、法提取牡丹幼嫩葉片的DNA，分別對其進行紫外吸收檢測、電泳檢測和RAPD檢測，結(jié)果表明：DNA完整性好，RAPD擴增帶清晰，A260/A280的值在1.8～2.0之間，滿足RAPD反應(yīng)的要求。
　　 (2)通過對模板DNA、引物、TaqDNA聚合酶、dNTP和Mg2+濃度的優(yōu)化試驗及對PCR反應(yīng)程序的篩選，確定了本研究的適宜反應(yīng)體系和反應(yīng)程序。反應(yīng)體系：模板DNA1μL(20ng/μL)，10×PCR緩沖液2μL，隨機引物0.8

3、μL(2.5μmol/L)、dNTPs0.8μL(2.5mmol/μL)、MgCl21.6μL(25mmol/L),Taq-DNA聚合酶0.25μL(5U/μL),雙蒸水13.55μL，總反應(yīng)體系20μL。反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性5min，94℃變性1min，36℃退火1min，72℃延伸1.5min，共40個循環(huán)，最后72℃延伸10min，4℃保存。
　　 (3)利用對100個引物進行篩選所得到的8個引物對39個牡丹樣品進行R

4、APD分析，共檢測到139個位點，其中118個多態(tài)位點，多態(tài)位點百分率達到84.89％。平均每個引物獲得17.38個擴增位點，其中具有多態(tài)性的位點為14.75個。各品種間多態(tài)位點百分率變化范圍為79.36～88.19％，其中多態(tài)位點百分比最高的是引物S30，最低的是引物S85。
　　 (4)利用RAPD技術(shù)對39份牡丹材料進行分類研究，通過聚類分析，估算遺傳距離，建立樹狀圖，當相異系數(shù)為0.46時，39個牡丹品種明顯聚為兩大類，