柿及其近緣種親緣關(guān)系及柿品種遺傳多樣性的研究.pdf

1、柿(Diospyros kaki Thunb.)為柿科(Ebenaceae)柿屬（Diospyros Linn.）植物，是我國重要的經(jīng)濟(jì)林樹種，有鐵桿莊稼之稱。絕大多數(shù)柿品種為六倍體(2n=6X=90)，少數(shù)為九倍體(2n=9X=135)。我國是柿屬植物的分布和原產(chǎn)中心之一，擁有豐富的種質(zhì)資源，為柿屬種質(zhì)資源的起源進(jìn)化、親緣關(guān)系以及遺傳多樣性等研究提供豐富的研究材料，但針對我國整個柿屬植物親緣關(guān)系的研究卻鮮有報道。雖然前人對柿及其近緣種

2、親緣關(guān)系的研究較多，但結(jié)果不完全一致，柿及其近緣種的親緣關(guān)系至今尚不清楚。為分析我國柿屬植物的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系和弄清楚柿及其近緣種間的親緣關(guān)系，本文以17種柿屬植物資源為研究對象，利用葉綠體DNA(cpDNA) trnQ-rps16序列分析17種柿屬植物的起源進(jìn)化關(guān)系，然后采用限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)和ITS、ndhA序列對所選柿及其近緣種進(jìn)行分析，以更準(zhǔn)確確定柿及其近緣種的親緣關(guān)系。此外，本研究還對93份柿品種ITS序

3、列進(jìn)行序列分析，并依據(jù)品種間差異位點對柿品種資源進(jìn)行遺傳差異分析。主要研究結(jié)果如下:
　　1.以17種柿屬植物共19份資源為試材，分析其葉綠體trnQ-rps16序列變異特征，并通過jModelTest2.1.5軟件計算堿基進(jìn)化模型，依據(jù)進(jìn)化模型采用最大簡約法(MP)和最大似然法(ML)對19份試材進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。結(jié)果表明:19份柿屬植物分成了兩大分支，第一分支為柿及其近緣的9個種，第二分支為其余8個種。根據(jù)此次研究對柿及其近緣

4、種分支進(jìn)行分析得出，第一分支中與柿近緣的8個種中，象牙柿與莖花柿與其余近緣種親緣關(guān)系也較遠(yuǎn)，故后續(xù)關(guān)于柿及其近緣種親緣關(guān)系的研究中選擇云南野毛柿、油柿、君遷子、浙江柿、金棗柿和美洲柿作為柿的近緣種研究，而烏柿則作為柿及其近緣種的外類群進(jìn)行研究。
　　2.利用5對cpDNA特異引物和7種限制性內(nèi)切酶共35對引物/酶組合對柿及其近緣種進(jìn)行PCR-RFLP進(jìn)行分析，結(jié)果表明:供試柿種質(zhì)資源存在豐富的種間多態(tài)性，但供試22個柿種內(nèi)品種未檢

5、測到變異位點。應(yīng)用NTSYS中UPGMA法聚類和主坐標(biāo)分析均表明:柿與金棗柿最近緣，其次分別是油柿、云南野毛柿、浙江柿和君遷子，而與美洲柿和烏柿相距較遠(yuǎn)。野柿（浙江）作為柿的一個變種，聚類結(jié)果也表明野柿（浙江）與柿有一定差異。研究表明:柿品種內(nèi)僅ndhA條帶有微小種內(nèi)差異，可進(jìn)一步對ndhA進(jìn)行測序研究。此外，由于葉綠體DNA相當(dāng)保守，也可利用核基因ITS進(jìn)行測序研究。
　　3.利用ITS和ndhA序列變異分析8種共102個基因型

6、的親緣關(guān)系和種內(nèi)遺傳差異，并通過計算兩個序列及合并后的進(jìn)化模型，依據(jù)進(jìn)化模型采用ML法分析其進(jìn)化關(guān)系。結(jié)果表明:(1)綜合ITS和ndhA序列進(jìn)化樹分析表明:柿與油柿和云南野毛柿親緣關(guān)系最近，之后分別是金棗柿，君遷子和浙江柿，與美洲柿和烏柿最遠(yuǎn)。(2)93份柿品種材料的ITS長度均為730，包括8個變異位點，據(jù)此8個變異位點可將供試柿種內(nèi)93個品種聚成16個類型，而ndhA序列在柿種內(nèi)品種間則無差異位點存在。研究認(rèn)為，ndhA和ITS能