樟樹幾種化學(xué)類型及近緣種遺傳多樣性研究.pdf

1、樟樹用途廣，經(jīng)濟(jì)價值高，其主、副產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于建筑、工藝、化工、軍工、醫(yī)藥等方面。本研究以樟樹幾種化學(xué)類型及近緣種為對象，應(yīng)用RAPD和ISSR分子標(biāo)記手段對其進(jìn)行研究，分析了樟樹幾種化學(xué)類型及近緣種的親緣關(guān)系和遺傳多樣性。通過研究得到以下結(jié)論： 1.參照常規(guī)RAPD和ISSR分析程序，在對樟樹幾種化學(xué)類型及近緣種的分析時做了進(jìn)一步優(yōu)化，摸索出了一種樟樹DNA提取的可靠方法，建立了一套適合樟樹RAPD和ISSR反應(yīng)的體系。本研究

2、中建立的樟樹RAPD反應(yīng)體系為：20μL反應(yīng)體系，內(nèi)含50ng模板DNA，2.0mmol/LMgCl2,200nmol/L引物，150μmol/LdNTPs，1UTaqDNA聚合酶，1×buffer。擴(kuò)增程序：94℃預(yù)變性7min；然后38個循環(huán)(94℃變性30s，37℃退火30s，72℃延伸90s)；最后72℃延伸10min。ISSR最佳反應(yīng)體系為：20μL反應(yīng)體系，內(nèi)含50ng模板DNA，2.0mmol/LMgCl2，200nmol

3、/L引物，200μmol/LdNTPs，0.5UTaqDNA聚合酶，1×buffer。擴(kuò)增程序：94℃預(yù)變性7min；然后38個循環(huán)(94℃變性30s，特定溫度下退火45s，72℃延伸90s)；最后72℃延伸10min。 2.從112條RAPD隨機(jī)引物中篩選出23條在樣品間具有多態(tài)性的引物，對樟樹幾種化學(xué)類型及近緣種的35份樣品進(jìn)行擴(kuò)增，共產(chǎn)生173條RAPD標(biāo)記條帶，其中多態(tài)性帶81條，多態(tài)性百分率為46.8％，平均每個引物檢

4、測到的條帶數(shù)為7.5條；從46條ISSR引物中共篩選出16條在所有樣品中均能產(chǎn)生清晰擴(kuò)增帶的ISSR引物，擴(kuò)增共產(chǎn)生141條ISSR標(biāo)記帶，其中多態(tài)性帶78條，多態(tài)性百分率為55.3％，平均每個引物檢測到的條帶數(shù)為8.8條。對兩種標(biāo)記的檢測效果表明，ISSR和RAPD標(biāo)記所得結(jié)果呈極顯著相關(guān)，證明這兩種標(biāo)記技術(shù)均可用于樟科植物的遺傳多樣性和親緣關(guān)系研究，但I(xiàn)SSR效果明顯優(yōu)于RAPD。 3.根據(jù)RAPD和ISSR結(jié)果聚類分析，表

5、明樟樹幾種化學(xué)類型及近緣種間遺傳多樣性明顯。根據(jù)DNA標(biāo)記數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化遺傳距離矩陣所作樹系圖表明，RAPD聚類結(jié)果和ISSR聚類結(jié)果均可將材料劃分為4大類群，其中近緣種種內(nèi)的遺傳差異不大，而幾種化學(xué)類型間有明顯的遺傳變異，但差異程度明顯小于近緣種之間的遺傳差異，樟樹與近緣種及近緣種種間差異較大。因此可以得出結(jié)論，樟樹的遺傳變異豐富。 通過RAPD和ISSR標(biāo)記分析，可以把福建省的樟樹分為三個基因型，即芳樟型、腦樟型和桉樟型，與化學(xué)分