小尾寒羊無(wú)角性狀的DNA標(biāo)記及其差異表達(dá)基因的篩選研究.pdf

1、培育無(wú)角羊品種在養(yǎng)羊生產(chǎn)中具有很多的優(yōu)勢(shì)。無(wú)角羊不易破壞圍欄,在舍飼時(shí)占舍面積相對(duì)少,且也減少了角生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng),同時(shí)減少角斗傷殘的損失,無(wú)角羊較有角羊便于管理。在澳大利亞已培育成無(wú)角陶賽特羊優(yōu)良品種,無(wú)角羊已成為羊品種的發(fā)展趨勢(shì)。所以,培育無(wú)角綿羊品種對(duì)畜牧業(yè)發(fā)展具有很大的意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)分子生物學(xué)方法尋找與綿羊角相關(guān)的基因,為今后培育無(wú)角綿羊品種提供理論依據(jù)。其研究結(jié)果如下:1、微衛(wèi)星標(biāo)記的研究:實(shí)驗(yàn)以河北小尾寒羊、無(wú)角道賽特、雜種

2、蒙古羊三個(gè)品種不同角型的羊?yàn)闃颖?對(duì)微衛(wèi)星位點(diǎn)AGLA226進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)共找出8個(gè)等位基因(A:190bp、B:166bp、C:184bp、D:160bp、E:180bp、F:156bp、G:175bp、H:152bp),4種基因型AB、CD、EF、GH。通過(guò)SPSS軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行獨(dú)立性卡方檢驗(yàn),結(jié)果表明角型與微衛(wèi)星AGt,A226的關(guān)聯(lián)性差異不顯著(P>0.05)。
　　 2、SNPs分析:本研究利用PCR—SSCP

3、的技術(shù),以牛SYNJ1基因序列為引物,以三個(gè)牛品種(有角荷斯坦奶牛、無(wú)角安格斯、無(wú)角海福特牛)以及無(wú)角河北小尾寒羊、無(wú)角道賽特、雜種蒙古羊三個(gè)品種不同角型的羊DNA為模版,對(duì)SYNJ1基因進(jìn)行SSCP分析及PCR產(chǎn)物測(cè)序。結(jié)果表明:在SNP bSYNJ1_C3981T位點(diǎn)上未發(fā)現(xiàn)多態(tài)性及與角性狀相關(guān)的SNP,在牛羊物種間只存在一個(gè)C-T核苷酸差異。
　　 3、DDRT-PCR的研究:實(shí)驗(yàn)以有角和無(wú)角綿羊各3只為樣本,分別提取總

4、RNA。根據(jù)表型組成有角RNA池和無(wú)角RNA池。反轉(zhuǎn)錄后兩角型的cDNA進(jìn)行DDRT-PCR分析,共篩選出30條差異片段,經(jīng)過(guò)二次擴(kuò)增、克隆測(cè)序等方法剔除假陽(yáng)性后,剩余7條差異片段。以該7條片段的測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)引物,再以原RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增再進(jìn)一步剔除假陽(yáng)性片段,最后剩余一條差異片段S1-162。經(jīng)生物信息學(xué)分析,在GenBank里分析發(fā)現(xiàn)該片段序列與綿羊的keratin83(角蛋白83)的mRNA序列(1687-184