美國黑莓果實中花色苷的提取純化、穩(wěn)定性及抗氧化活性研究.pdf

1、美國黑莓（American blackberry）屬薔薇科懸鉤子植物，原產(chǎn)北美，是近年風(fēng)靡全球的第三代水果的代表品種。果實柔軟多汁，色澤宜人，營養(yǎng)豐富，有香味，含糖6％-10.67％，含有人體必需的17種氨基酸和維生素，其中維生素C的含量是蘋果的5倍、葡萄的6倍，食之消暑生津、止渴除痰、醒酒提神。特別重要的是：黑莓果實含有極為豐富的色素及纖維素。其中色素屬花色苷類，其基本結(jié)構(gòu)為矢車菊色素在3位和5位上與葡萄糖等形成糖苷鍵。黑莓中的花色苷

2、具有抗氧化、抗突變、預(yù)防心腦血管疾病、保護肝臟、抑制腫瘤細(xì)胞發(fā)生等多種生理功能。其中的矢車菊色素-3-葡萄糖苷是黑莓中含有的重要生物活性物質(zhì)，具有降低血清蛋白和脂質(zhì)體過氧化作用，并且對局部貧血肝臟的氧化性損傷具有保護作用。本實驗以美國黑莓作為研究對象，對其花色苷的提取純化及其穩(wěn)定性和抗氧化活性進行了研究。
　　 本論文首先確立了分析方法：應(yīng)用分光光度法測定美國黑莓色素中花色苷總含量。采用了四種抗氧化活性測定方法：清除羥基自由基活

3、性測定方法、清除DPPH自由基活性測定方法、清除超氧陰離子自由基測定方法和抑制亞油酸過氧化測定方法，用來測定黑莓花色苷的抗氧化活性。
　　 在提取工藝研究中，采用了溶劑法，超聲波輔助法，酶法及微波法四種方法。通過對提取各因素進行單因素條件實驗和正交試驗，確定溶劑法提取黑莓花色苷的最佳提取條件為；乙酸濃度為30％，提取溫度為25℃，提取時間為60min，料液比為1:2。超聲波輔助提取法提取美國花色苷的最佳提取條件為：乙酸濃度35％

4、，提取溫度30℃，提取時間40min，料液比1:2；酶法最佳提取條件為：纖維素酶濃度為5mg/g，提取溫度為55℃，提取時間為90min，料液比為1:2；微波法最佳條件為：料液比1:2，提取溫度60℃，提取時間5min，提取功率800W。溶劑浸提法提取效果最好，但提取較長。
　　 在純化研究中，應(yīng)用大孔樹脂純化黑莓提取物中花色苷的技術(shù)工藝。研究結(jié)果表明，選用AB-8大孔樹脂為吸附劑，上樣濃度0.2mg/mL，吸附流速1.0mL/

5、min，附溫度25℃；較適宜的解析條件為：洗脫劑為60％乙醇溶液，洗脫流速為1mL/min。純化后提取物的純度（按矢車菊色素計算）為22.4％，吸附平衡時間為4h，解析平衡時間為3h。
　　 在對黑莓花色苷的穩(wěn)定性研究結(jié)果表明，隨著pH值的升高，最大吸收波長逐漸變大，色素的顏色由紅色逐步變?yōu)樗{(lán)色。在酸性條件下，黑莓花色苷的光穩(wěn)定性較好，隨著pH值的升高色素開始降解，黑莓花色苷在自然光直射比避光條件下的褪色快，酸性條件下熱穩(wěn)定性較

6、好，100℃時，pH值在4.0-6.0的花色苷熱穩(wěn)定性較差。Fe2+和Na+對花色苷的穩(wěn)定性無不良影響；Cu2+、Mg2+、K+、Zn2+、Ca2+、Fe3+對花色苷的穩(wěn)定性均有不良影響。蔗糖、D-果糖、麥芽糖均對花色苷的穩(wěn)定性有增強作用，葡萄糖穩(wěn)定性較差。Vc的加入對花色苷的穩(wěn)定性有明顯的破壞作用，苯甲酸鈉，酒石酸對花色苷的穩(wěn)定性有明顯的不良影響。檸檬酸的加入對花色苷穩(wěn)定性無顯著影響，H2O2和亞硫酸鈉的加入導(dǎo)致花色苷穩(wěn)定性下降。