平邑甜茶MhWRKY15基因的克隆及表達分析.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子是結(jié)合在目的基因特定DNA序列上的蛋白質(zhì)，它通過增強或抑制基因的轉(zhuǎn)錄效率來調(diào)控基因的表達水平，真核生物的基因表達調(diào)控主要是在轉(zhuǎn)錄水平進行。WRKY轉(zhuǎn)錄因子作為一種重要的誘導型調(diào)節(jié)因子，參與植物的多種防衛(wèi)反應、生長發(fā)育調(diào)節(jié)以及物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)等各種重要生理活動。
　　 平邑甜茶（Malus hupehensis(Pamp)Rehd.Var pinyiensis Jiang）是我國特有的植物資源，常用作蘋果和觀賞海棠的砧木。本研

2、究以平邑甜茶為試材，克隆了MhWRKY15基因的全長cDNA序列，并運用生物信息學手段分析了其基因序列與編碼蛋白的性質(zhì)和功能；同時，研究了其在生長過程及逆境脅迫下的表達情況，并成功構(gòu)建RNAi載體并轉(zhuǎn)化擬南芥，獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥植株。主要結(jié)果如下：
　　 1).獲得了平邑甜茶MhWRKY15基因，該基因cDNA全長1091bp，含有810bp的完整開放閱讀框，編碼269個氨基酸，屬于WRKY類轉(zhuǎn)錄因子的第II組，為WRKY15家族

3、成員。GenBank登錄號為GU576874。
　　 2).生物信息學分析表明，MhWRKY15編碼蛋白為可溶性蛋白，其分子式為C1263H1941N365O425S12，相對分子量為29423.2Da，理論等電點為5.30；含有一個WRKY保守結(jié)構(gòu)域，無跨膜域，無信號肽，存在磷酸化、N糖基化和O糖基化位點；其二級結(jié)構(gòu)主要以無規(guī)則卷曲為主。
　　 3).構(gòu)建了pCAMBIA1390-MhWRKY15-GFP表達載體，亞細