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文檔簡(jiǎn)介
1、平邑甜茶(Malus hupehensis(Pamp)Rehd.var pinyiensis Jiang)是我國(guó)特有的蘋果砧木。本研究以平邑甜茶為試材,結(jié)合蘋果基因組數(shù)據(jù)庫(kù)http://genomics.re search.iasma.it/,克隆了平邑甜茶MhBI-1基因的完整編碼區(qū)序列,分析了其基因序列與編碼蛋白的性質(zhì)和功能,并成功構(gòu)建了MhBI-1基因正反義表達(dá)載體;同時(shí)獲取了蘋果MdBI-1s家族基因序列,研究了它們?cè)谔O果不同品
2、種、不同組織以及在平邑甜茶根不同生長(zhǎng)時(shí)期及高溫脅迫下的表達(dá)情況。此外,還研究了平邑甜茶新根(延長(zhǎng)根和吸收根)抗凋亡基因MhBI-1、MhBAG、MhHSP70在正常管理、2,4-D及干濕交替作用下的表達(dá)情況。主要結(jié)果如下:
1)獲得了平邑甜茶MhBI-1基因,該基因編碼區(qū)序列長(zhǎng)747 bp,編碼248個(gè)氨基酸,GenBank登錄號(hào)為KC456613。
2)獲得了蘋果MdBI-1s家族基因,該基因家族共有10個(gè)
3、基因,構(gòu)建了該基因家族系統(tǒng)進(jìn)化樹,并對(duì)其表達(dá)特征進(jìn)行了半定量測(cè)定。半定量RT-PCR結(jié)果表明,MdBI-1s表達(dá)有一定的相似性,在莖中的表達(dá)高于葉和根;在新疆野蘋果中的表達(dá)高于山定子、平邑甜茶和八棱海棠。在幼苗階段,隨生長(zhǎng)時(shí)間,MdBI-1s表達(dá)呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì),六葉齡期時(shí)達(dá)到高峰;42℃高溫脅迫下,MdBI-1s表達(dá)隨脅迫程度的加劇呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì),2h時(shí)到達(dá)高峰。
3)構(gòu)建了pET-30a-MhBI-1原核表達(dá)
4、載體,進(jìn)行了原核表達(dá)試驗(yàn),測(cè)定MhBI-1蛋白大小約為25 kD。
4)構(gòu)建了pBI121-MhBI-1正反義表達(dá)載體,通過(guò)花序侵染法轉(zhuǎn)化擬南芥得到T0代種子。
5)正常生長(zhǎng)時(shí),吸收根細(xì)胞死亡率及相關(guān)代謝活性:根系活力、ATP含量和類caspase3/7活性變化呈現(xiàn)波動(dòng)性,相對(duì)于延長(zhǎng)根,其水平高且變化頻率快,抗凋亡基因MhHSP70、MhBI-1和MhBAG在吸收根中表達(dá)也呈現(xiàn)相似的特點(diǎn),反映了吸收根生命周期
5、短,更新速度快與代謝活躍的特點(diǎn)。延長(zhǎng)根變化相對(duì)穩(wěn)定,呈現(xiàn)“臺(tái)階式變化”,活躍期后呈現(xiàn)出生長(zhǎng)抑制階段,在這個(gè)過(guò)程中,延長(zhǎng)根MhHSP70、MhBI-1基本處于被抑制狀態(tài),MhBAG出現(xiàn)了明顯的表達(dá)高峰,這可能與延長(zhǎng)根的生長(zhǎng)狀態(tài)有關(guān)。
6)在2,4-D及干濕交替作用下,新根出現(xiàn)了細(xì)胞死亡率及類caspase3/7活性升高,ATP含量及根活力下降,抗凋亡基因表達(dá)升高的趨勢(shì)??沟蛲龌虻母弑磉_(dá)有利于減少細(xì)胞凋亡的發(fā)生;在抗凋亡基因
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