亞硝酸鹽降解菌AQ-3的分離鑒定及安全性研究.pdf

1、近年來(lái),隨著我國(guó)集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖的快速發(fā)展,池塘老化、放養(yǎng)密度過(guò)高、投飼殘餌過(guò)多等諸多因素普遍引起養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽超標(biāo),屢屢發(fā)生水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物中毒死亡事件。物理法、化學(xué)法等常用的亞硝酸鹽降解辦法存在很大的局限性,效果也不理想,生物法以其更有效、價(jià)格更低廉等優(yōu)點(diǎn)深受廣大養(yǎng)殖戶的青睞,因此,篩選具有良好降解效果、在養(yǎng)殖水體穩(wěn)定安全的亞硝酸鹽降解菌,對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展是十分必要的,并且具有廣泛的應(yīng)用前景。雖然亞硝酸鹽降解菌得到廣大學(xué)者的關(guān)注,對(duì)

2、其研究也變得逐步深入和廣泛,但實(shí)際養(yǎng)殖中,亞硝酸鹽中毒引起死亡事故仍然時(shí)有發(fā)生,亞硝酸鹽氮超標(biāo)問(wèn)題仍未得到根本解決。我國(guó)對(duì)亞硝酸鹽降解菌的研究起步相對(duì)較晚,研究基礎(chǔ)也相對(duì)薄弱,許多問(wèn)題尚未弄清楚,相關(guān)研究中存在很多問(wèn)題。尤其是菌株的安全性未得到重視,養(yǎng)殖水體中大量投入外來(lái)菌株,存在很多安全隱患,可能會(huì)對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物甚至對(duì)人類造成威脅,益生菌的安全性值得重視。本論文針對(duì)亞硝酸鹽降解菌優(yōu)良菌種匱乏,從養(yǎng)殖水體中分離、篩選到一株降解特性優(yōu)良的

3、菌株,并對(duì)其對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物和水體環(huán)境的安全性進(jìn)行了初級(jí)評(píng)價(jià)。現(xiàn)分別報(bào)道如下:
　　實(shí)驗(yàn)從養(yǎng)殖污泥中分離篩選了一株優(yōu)良的亞硝酸鹽去除菌AQ?3,其對(duì)亞硝酸鹽的去除率高達(dá)99.47％。通過(guò)API ID32GN細(xì)菌鑒定系統(tǒng)以及16S rDNA序列分析法,菌株AQ?3被鑒定為鮑氏不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii)(GenBank登錄號(hào):JF751054.1),其16S rDNA序列與基因庫(kù)中不動(dòng)桿菌屬菌株的16S

4、rDNA序列有99%?100%的同源性,而且與不動(dòng)桿菌TW(GenBank登錄號(hào):FJ753401.1)的親緣關(guān)系最近。菌株AQ?3去除亞硝酸鹽的最適初始pH范圍為7?9,最佳碳源為乙酸鈉和丁二酸鈉,而且隨著初始菌濃度的不斷增大,菌株AQ?3對(duì)亞硝酸鹽的去除率顯著升高;隨著亞硝酸鹽氮濃度的不斷增大,菌株AQ?3對(duì)亞硝酸鹽的去除率逐漸降低。
　　實(shí)驗(yàn)對(duì)分離的亞硝酸鹽降解菌AQ-3的致病性和耐藥性進(jìn)行了分析。對(duì)分離菌株AQ-3進(jìn)行了a

5、erA、hlyA、ahpA、alt、ast五種重要致病基因的檢測(cè),結(jié)果顯示,菌株AQ-3不具有這五種致病基因,為了進(jìn)一步驗(yàn)證其致病性和感染性,我們對(duì)小白鼠和鯽魚(yú)分別進(jìn)行了口灌,分析其血液指標(biāo)的變化,進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)觀察,血液指標(biāo)正常,未發(fā)現(xiàn)死亡或其他發(fā)病等不正常癥狀,因此,我們初步認(rèn)定菌株AQ-3不具有致病性和感染性。同時(shí),對(duì)菌株AQ-3進(jìn)行耐藥性檢測(cè),結(jié)果顯示菌株AQ-3對(duì)水產(chǎn)常用抗菌藥均極度敏感,進(jìn)一步為其安全性提供佐證。
　　實(shí)

6、驗(yàn)評(píng)價(jià)了分離的亞硝酸鹽降解菌 AQ-3的環(huán)境安全性。方法參照《GB/T21805-2008化學(xué)品藻類生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)》、《GB/T13266-91水質(zhì)物質(zhì)對(duì)蚤類(大型蚤)急性毒性測(cè)定方法》、《GB/T13267-91水質(zhì)物質(zhì)對(duì)淡水魚(yú)(斑馬魚(yú))急性毒性測(cè)定方法》、《漁藥臨床試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范》等國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)法規(guī),觀察了亞硝酸鹽降解菌AQ-3對(duì)小球藻生長(zhǎng)抑制作用以及對(duì)大型蚤、斑馬魚(yú)的急性毒性,分析了其對(duì)養(yǎng)殖水體主要理化因子的影響。結(jié)果顯示,亞硝酸鹽