亞硝酸鹽對虎紋蛙的毒性影響.pdf

1、虎紋蛙（Hoplobatrachus rugulosus）又名石蝓、水雞、田雞，隸屬兩棲綱(AmpHibia)、無尾目(Anura)、叉舌蛙科(Dicroglossidate)、虎紋蛙屬（Hoplobatrachus）。虎紋蛙不僅有益于農(nóng)林業(yè)，而且肉質(zhì)干脆，是很多餐飲美食愛好者首選。為了滿足人們各方面的需求，虎紋蛙養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)便迅速發(fā)展起來。但養(yǎng)殖過程中，向養(yǎng)殖水體投入過量餌料易導(dǎo)致高蛋白殘餌和排泄物不斷沉積于池底，并被水中的微生物分解為含

2、氮物，而造成養(yǎng)殖水體中氨態(tài)氮和亞硝態(tài)氮等有害物質(zhì)的累積。正常情況下，這些有害物質(zhì)均可通過硝化細(xì)菌的硝化作用轉(zhuǎn)化成無毒的硝酸鹽或者被水體中藻類生物所利用形成氮?dú)馀懦鲶w外，使得水體環(huán)境處于一種自凈平衡的狀態(tài);但是水產(chǎn)養(yǎng)殖中定期使用消毒劑，有益菌體全部致死，阻斷了整個過程中的消化和分解作用，使養(yǎng)殖水體水質(zhì)迅速惡化，產(chǎn)生大批量死亡的現(xiàn)象。有關(guān)亞硝酸鹽對水產(chǎn)生物的危害機(jī)理在國內(nèi)有大量研究報(bào)道。亞硝酸鹽對動物的致毒機(jī)理是將動物體內(nèi)血紅蛋白球中的血紅

3、蛋白轉(zhuǎn)化為高鐵血紅蛋白，降低血液載氧的能力，從而產(chǎn)生組織缺氧，膜通透性改變，組織自溶性提高等病理現(xiàn)象。目前，國內(nèi)有關(guān)亞硝酸鹽對虎紋蛙的毒性研究極少，這極大地制約了虎紋蛙的規(guī)?；B(yǎng)殖和產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，因此實(shí)驗(yàn)探究亞硝酸鹽脅迫下虎紋蛙其高鐵血紅蛋白含量、能量代謝及抗氧化指標(biāo)的變化關(guān)系，能為制定虎紋蛙的健康養(yǎng)殖提供科學(xué)依據(jù)。
　　為了探討?zhàn)B殖水環(huán)境中的亞硝酸鹽對虎紋蛙血液中血紅蛋白以及能量利用方式的變化情況，開展了不同濃度梯度亞硝酸鹽

4、脅迫下高鐵血紅蛋白含量、血糖、肝糖原、乳酸含量、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的測定。通過急性毒理實(shí)驗(yàn)測定虎紋蛙的半致死濃度LC50值，設(shè)置五個濃度梯度，每個梯度中放置30只健壯虎紋蛙，每一梯度有三個平行，得出96 h的半致死濃度后，以此為基準(zhǔn)點(diǎn)設(shè)置有生理學(xué)意義的亞硝酸鹽濃度。本實(shí)驗(yàn)設(shè)置的濃度為40、50、60、70、80mg/L亞硝酸鹽脅迫組和0mg/L對照組在不同時間(6h、12h、24h、48h)條件下各個指標(biāo)的變化，

5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.半致死濃度的確定:6h、12h、24 h時各個實(shí)驗(yàn)組的虎紋蛙的致死率都相對較低，但隨著時間的遞增，虎紋蛙死亡個體明顯增多，在96h后40、50、60、70、80mg/L五個脅迫組的死亡率達(dá)到12.3％、31.6％、67.9％、72.9％、75.4％。虎紋蛙在亞硝酸鹽脅迫下24h、48h、72h、96h，其半致死濃度LC50分別為127.6mg/L、84.3mg/L、75.2mg/L、72.7mg/L，隨暴露

6、時間的延長，其LC50值逐漸變小，但72 h后的LC50值相差不大。
　　2.高鐵血紅白含量的測定:50、60、70、80mg/L脅迫組的高鐵血紅蛋白含量與對照組之間存在顯著性差異(P＜0.05)，對照組高鐵血紅蛋白量明顯低于脅迫組，說明脅迫組中虎紋蛙血液內(nèi)必然存在血紅蛋白轉(zhuǎn)換成高鐵血紅蛋白這一過程。同一濃度脅迫下，隨著時間的推移，高鐵血紅蛋白含量呈增長趨勢，同時也說明了亞硝酸鹽在虎紋蛙體內(nèi)存在一個累積效應(yīng)。
　　3.各脅迫

7、組血糖濃度均顯著高于對照組，同一濃度脅迫下，隨著時間的推移，血糖含量有先升后降的趨勢;各實(shí)驗(yàn)脅迫組肝糖原含量顯著低于對照組，相同濃度脅迫下，隨著時間的推移，肝糖原含量呈現(xiàn)先升后降的趨勢;6h、12h、24h時間條件下的亞硝酸鹽各個脅迫組中蛙體肌肉中乳酸含量差異不顯著，但脅迫48h后，各濃度組乳酸含量明顯高于對照組。血糖指標(biāo)的高低常?？梢杂米髟u判健康動物此時的生理狀態(tài)，應(yīng)激時血液葡萄糖含量較正常情況會相對偏高，故血糖含量先升高的結(jié)果表明水

8、體中的亞硝酸鹽對虎紋蛙形成了應(yīng)激條件。高鐵血紅蛋白含量會影響正常的攜氧功能，致使機(jī)體在應(yīng)激期主要通過糖酵解途徑提供能量，所以肝糖原含量下降，肌肉中乳酸的含量卻反而上升。虎紋蛙能量代謝利用方式的變化間接說明了虎紋蛙對亞硝酸鹽的敏感度和耐受度。
　　4.經(jīng)過亞硝酸鹽處理過的實(shí)驗(yàn)組虎紋蛙肝胰腺中的SOD活性與對照組相比差異顯著，同一濃度梯度下，隨著時間的推移，SOD活性逐漸減少，80mg/L的濃度實(shí)驗(yàn)組SOD活性甚至小于對照組含量，該結(jié)

9、果說明了亞硝酸鹽在虎紋蛙機(jī)體內(nèi)存在累積效應(yīng)，所以暴露時間越長，虎紋蛙中毒狀態(tài)越嚴(yán)重，虎紋蛙應(yīng)對脅迫因子的能力越弱，SOD活性也就越來越低;一定的時間條件下，50、60、70mg/L SOD活性隨濃度增加而降低，但是40mg/L實(shí)驗(yàn)組呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢，在12h達(dá)到最大值，是對照組的1.5倍，該結(jié)果說明在適宜濃度的亞硝酸鹽脅迫下，虎紋蛙自身有一種耐受力，脅迫因子的刺激使得其體內(nèi)自由基含量增加，所以作為清除自由基的關(guān)鍵酶SOD也相應(yīng)增加