2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、J亞群禽白血病病毒(ALV-J)是反轉(zhuǎn)錄病毒科α腫瘤病毒屬的禽白血病病毒/禽肉瘤病病毒群中的一個(gè)亞群,由英國(guó)學(xué)者Payne于1991年在肉雞上發(fā)現(xiàn)。該病毒主要引起雞的髓細(xì)胞瘤白血病,給世界上許多國(guó)家的養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。ALVJ既可水平傳播,又可垂直傳播。目前,種群凈化是防控J亞群禽白血病的有效措施,因此有必要建立起準(zhǔn)確、快速、靈敏的ALV-J檢測(cè)技術(shù)。
   本研究采用PCR方法克隆出本室分離保存的JS-9-09-Ch

2、株ALV完整的gp85基因,并進(jìn)行測(cè)序,上傳序列獲得GenBank登錄號(hào)為:JF911743。分別克隆到pET-32a(+)和pGEX-6P-1載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-32a(+)-gp85和pGEX-6P-1-gp85。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌,以IPTG誘導(dǎo)表達(dá)gp85融合蛋白。表達(dá)的融合蛋白分別用High-Affinit),Ni-IDA Resin和High-Affinity GST Resin純化。以His-gp85融合蛋白與等

3、量弗氏完全佐劑乳化后免疫SPF雞,每隔兩周進(jìn)行加強(qiáng)免疫,制備抗gp85的陽(yáng)性血清。以GST-gp85包被酶標(biāo)板、抗gp85陽(yáng)性血清為一抗,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗雞IgG為二抗,建立起檢測(cè)ALV-J gp85抗體的間接ELISA方法。經(jīng)過(guò)對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化,確定GST-gp85最佳包被濃度為0.05μg/孔,陽(yáng)性血清的稀釋倍數(shù)為1:500,血清作用時(shí)間為60 min。
   將純化的GST-gp85融合蛋白用等量的弗氏完全佐劑乳

4、化,皮下多點(diǎn)免疫6周齡BALB/c小鼠,免疫劑量為200μg/只;每隔兩周以相同的方法以弗氏不完全佐劑與抗原乳化后加強(qiáng)免疫,免疫劑量為100μg/只;第四次免疫后兩周,以O(shè)ST-gp85融合蛋白按100μg/只的劑量加強(qiáng)免疫,4 d后取小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合。用純化的His-gp85包被ELISA反應(yīng)板,間接ELISA法篩選陽(yáng)性克隆,并對(duì)陽(yáng)性孔采用有限稀釋法進(jìn)行亞克隆,獲得6株穩(wěn)定分泌抗gp85單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。以

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