定量PCR和Western blot結(jié)合檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆植物組織和商業(yè)化大豆相關(guān)食品中CP4-EPSPS成分.pdf

1、隨著轉(zhuǎn)基因大豆（Roundup Ready Soya，簡(jiǎn)稱RRS）的普及，食品中轉(zhuǎn)基因成分的標(biāo)注成為了一項(xiàng)重要的安全議題。本研究采用CTAB試劑，對(duì)Biozol抽提法進(jìn)行改良提取植物組織中的DNA、RNA和蛋白質(zhì);進(jìn)而結(jié)合了定量PCR和Western blot來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆不同組織和不同大豆商業(yè)化食品中CP4-EPSPS基因和蛋白的表達(dá)。
　　 研究證明改良的Biozol一步法從玉米、大豆、苜蓿和黃瓜組織中不僅能一步提取得到相

2、應(yīng)的RNA和蛋白質(zhì)，DNA也有明顯的條帶。其中，獲得的RNA和DNA樣品經(jīng)紫外分光光度計(jì)測(cè)定和瓊脂糖凝膠電泳分析證明純度較高，血紅素加氧酶(hemeoxygenase，HO)基因HO-1和鈣依賴蛋白激酶（calcium-dependent protein kinase，CDRK）基因CDRK1的RT-PCR結(jié)果呈陽(yáng)性，所提取的蛋白質(zhì)也可以用于Western blot分析，且整個(gè)提取過(guò)程只需3 h;與分別提取RNA、DNA和蛋白質(zhì)的方法相

3、比，本一步法可同時(shí)分離單個(gè)樣品中的三種產(chǎn)品，避免了樣品間的誤差，而且提取所得的產(chǎn)物純度較高，為進(jìn)一步的研究提供了便利。
　　 進(jìn)而利用基因水平和蛋白水平兩種方法檢測(cè)不同大豆商業(yè)化食品中CP4-EPSPS基因和蛋白的表達(dá)。所檢食物制品包括轉(zhuǎn)基因植物源食品和同時(shí)含有大豆蛋白和肉品的食品。在驗(yàn)證兩種方法的可用性之后，本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在部分所檢食物中至少有兩條蛋白降解條帶被檢測(cè)到（35.5和24.6 kD）。在豆腐皮和豆干樣品中，檢測(cè)