western blot 原理和操作方法

1、WesternWesternBlotBlot原理和操作方法（詳細(xì)）原理和操作方法（詳細(xì)）$5V工作原理工作原理Y|_Y|_2IU2IU蛋白質(zhì)的電泳分離是重要的生物化學(xué)分離純化技術(shù)之一電泳是指帶電粒子在電場(chǎng)作用下向著與其電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象.根據(jù)所采用的支持物不同有瓊脂糖凝膠電泳淀粉凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳等.其中聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)由于無電滲作用樣品用量少(1100μg)分辨率高可檢出1091012mol的樣品凝膠機(jī)械強(qiáng)

2、度大重復(fù)性好以及可以通過調(diào)節(jié)單體濃度或單體與交聯(lián)劑的比例而得到孔徑不同的凝膠等優(yōu)點(diǎn)而受到廣泛的應(yīng)用.O`Q%9vSDSPAGE是最常用的定性分析蛋白質(zhì)的電泳方式特別是用于蛋白質(zhì)純度檢測(cè)和測(cè)定蛋白質(zhì)分子量.~&A另外樣品處理液中也可加入適量的甘油或蔗糖以增大溶液密度使加樣時(shí)樣品溶液可以沉入樣品加樣槽底部.T&ZpP_]2w30%丙烯酰胺(T:30%C:3%(ml)3.34.05.05.06.07.5ngl88w1.5mollTris.cl

3、(PH8.8)(ml)2.52.52.53.83.83.8Dj3=510%SDS(ml)0.10.10.10.150.150.155HHU.kmp10%AP(ml)0.10.10.10.150.150.15t9tNk@iTEMED(μl)444666z!bT`EQ.總體積(ml)630dF0=v#N[R“NP蛋白質(zhì)的樣品制備：FqeRI$P[蛋白質(zhì)的樣品制備是WesternBlotting的第一步，樣品制備是關(guān)鍵步驟，要求盡可能的獲得所