3個棉花LIM蛋白的亞細胞定位及生化功能的研究.pdf

1、棉花是世界上重要的經(jīng)濟作物，其棉纖維的產(chǎn)量和品質直接關系到人們的日常生活。棉纖維的品質對紡織工業(yè)來講尤為重要，高品質的棉花纖維不僅可以提高紡織業(yè)的工作效率而且可以生產(chǎn)出高質量的產(chǎn)品。
　　 LIM蛋白質家族是一類富含半胱氨酸且分子結構中具有一個或多個LIM結構域的蛋白質家族。每個LIM結構域，即(CX2CX17-19HX2CX2CX16-20CX2C/H/D)結構中通常含有兩個鋅指結構?，F(xiàn)有的研究表明植物中的LIM蛋白有兩大類功

2、能：一是作為轉錄因子調節(jié)靶基因表達的功能；二是作為肌動蛋白結合蛋白調節(jié)肌動蛋白細胞骨架結構的功能。到目前為止，有關棉花纖維產(chǎn)量和品質的分子調控機制雖然已有一些研究報道，但對LIM基因家族在棉花纖維發(fā)育過程中的功能研究尚未見報道。我們分離鑒定了3個棉花LIM基因，分別命名為GhLIM2，GhLIM5和GhLIM6。研究表明，這3個基因都在棉纖維中特異或優(yōu)勢表達，可能參與了棉纖維發(fā)育的調節(jié)。本文從LIM蛋白亞細胞定位、LIM蛋白與肌動蛋白F

3、-actin的結合及其對細胞骨架的調控等方面進行了研究探討，獲得的主要研究結果如下：
　　 1、GhLIM蛋白質的亞細胞定位。
　　 構建了PBI121-GhLIM2/5/6-GFP載體，通過農桿菌介導的棉花轉化的方法轉化棉花或者通過浸花法轉化擬南芥或者通過農桿菌注射法轉化煙草葉表皮細胞。在共聚焦顯微鏡下觀察到GhLIM5-GFP融合蛋白在擬南芥和棉花細胞中呈網(wǎng)絡狀分布。同樣地，GhLIM6-GFP融合蛋白在煙草和棉花細

4、胞中也呈網(wǎng)絡狀分布。我們使用羅丹明-鬼筆環(huán)肽染色法進一步證實GhLIM5-GFP和GhLIM6-GFP蛋白的定位在肌動蛋白細胞骨架上。
　　 2、原核表達的重組GhLIM蛋白質與F-actin直接相互作用。
　　 通過原核表達系統(tǒng)得到可溶性GhLIM蛋白質，在體外進行高速共沉淀實驗以驗證GhLIM蛋白質能否與F-actin直接相互作用。結果顯示3個GhLIM蛋白質均能與F-actin直接相互作用。
　　 3、原核