LIM家族蛋白Ajuba對腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)功能與分子機(jī)制研究.pdf

1、第一部分LIM家族蛋白Ajuba對結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞遷移的作用研究
　　目的探索結(jié)直腸癌細(xì)胞中Ajuba與Twist之間的相互作用，及該作用對于結(jié)直腸癌遷移所產(chǎn)生的影響。方法運用免疫共沉淀方法證明外源性Ajuba與Twist蛋白質(zhì)之間存在相互作用；熒光素酶活性檢測Ajuba對于Twist下游靶基因N-cadherin啟動子的轉(zhuǎn)錄活性；構(gòu)建結(jié)直腸癌SW1116-shAjuba/OEAjuba穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞，并進(jìn)行Transwell侵襲實驗觀察

2、細(xì)胞遷移能力變化。結(jié)果Ajuba與Twsit蛋白質(zhì)之間存在相互作用，并且Ajuba能通過Twist促進(jìn)N-cadherin的表達(dá)調(diào)控。在結(jié)直腸癌細(xì)胞SW1116-shAjuba穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞中可發(fā)現(xiàn)，AJUBA基因表達(dá)水平降低，蛋白表達(dá)下降，能抑制細(xì)胞遷移能力。結(jié)論Ajuba是轉(zhuǎn)錄因子Twist的共活化因子（coactivator），能夠促進(jìn)N-cadherin表達(dá)，增強(qiáng)結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移能力。
　　第二部分LIM蛋白Ajuba對乳腺癌

3、細(xì)胞的生物學(xué)作用與分子機(jī)制研究
　　目的探索Ajuba在雌激素受體α（Estrogen receptorα,ERα）陽性的乳腺癌細(xì)胞中的生物學(xué)作用，依據(jù)已知的Ajuba與ERα存在相互作用尋找涉及的分子機(jī)制。方法運用免疫共沉淀方法證明外源性Ajuba與ERα蛋白質(zhì)之間存在相互作用；構(gòu)建乳腺癌T47D-shAjuba、T47D-oeAjuba穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞，并進(jìn)行CCK8實驗觀察細(xì)胞生長能力變化；建立T47D-shERα穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞，比較生長

4、趨勢改變；熒光素酶活性檢測Ajuba-ERα對于下游靶基因CDK6啟動子的轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控。結(jié)果Ajuba與ERα之間存在相互作用，并且Ajuba能通過ERα促進(jìn)CDK6的表達(dá)調(diào)控。在乳腺癌細(xì)胞T47D-shAjuba穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞中可發(fā)現(xiàn)，AJUBA基因表達(dá)水平降低，蛋白表達(dá)下降，細(xì)胞生長緩慢；細(xì)胞中過表達(dá)Ajuba，則可上調(diào)CDK6的表達(dá)水平。結(jié)論Ajuba是ERα的共活化因子（coactivator），能夠促進(jìn)CDK6表達(dá)，參與調(diào)控乳腺癌細(xì)