免疫復(fù)合物在PRRSV-ADE作用中的研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PorcineReproductiveandRespiratorySyndromevirus，PRRSV)是能夠引起豬繁殖與呼吸綜合征(PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome，PRRS)的一種具有傳染性的病毒，該病毒主要造成仔豬呼吸障礙和母豬流產(chǎn)。PRRSV易變異，是單股正鏈RNA病毒，可引起豬的持續(xù)性感染和免疫抑制，具有抗體依賴性增強(qiáng)作用(Antibody-depen

2、dentenhancement，ADE)，因此研究PRRSV的ADE作用感染機(jī)制對(duì)PRRS的防治具有重要意義。FcγR可分為激活型和抑制型兩種，而FcγRⅡB是目前發(fā)現(xiàn)的唯一的抑制型的受體，在天然免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。本研究通過研究免疫復(fù)合物經(jīng)FcγR途徑增強(qiáng)PRRSV增殖作用，為進(jìn)一步深入研究免疫復(fù)合物對(duì)PRRSV-ADE的調(diào)節(jié)作用機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　 本研究以不同濃度非感染性免疫復(fù)合物分別處理豬肺泡巨噬細(xì)胞

3、(PAM細(xì)胞)，經(jīng)PRRSV感染48h后用已建立的PRRSVSYBRGreenⅠ實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)感染細(xì)胞中病毒RNA。結(jié)果顯示，當(dāng)非感染性免疫復(fù)合物作4倍和8倍稀釋時(shí)，PRRSV的復(fù)制水平較病毒感染組略為升高，說明免疫復(fù)合物能經(jīng)FcγR以非劑量依賴性方式增強(qiáng)PRRSV復(fù)制。本試驗(yàn)用5倍稀釋鼠抗豬FcγRⅡB抗體特異封閉PAM細(xì)胞表面FcγRⅡB受體，經(jīng)不同濃度的非感染性免疫復(fù)合物與病毒的混合物感染PAM細(xì)胞48h后用同樣的方法檢測(cè)

4、感染細(xì)胞中病毒RNA。結(jié)果顯示，2倍(2.635mg/mL)稀釋的免疫復(fù)合物在FcγRⅡB被封閉的情況下同樣能明顯的促進(jìn)病毒增殖，表明免疫復(fù)合物可通過激活型FcγR增強(qiáng)病毒復(fù)制。在上述試驗(yàn)基礎(chǔ)上，又選擇4倍稀釋的免疫復(fù)合物(1.30mg/mL)分別于感染前、感染后、或與病毒同時(shí)來處理PAM細(xì)胞，感染12h、24h、36h和48h后用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)感染細(xì)胞中病毒RNA。結(jié)果顯示，非感染性免疫復(fù)合物在感染12，24和36h時(shí)間段內(nèi)均

5、能明顯促進(jìn)病毒的增殖，但在48h后不顯著。說明免疫復(fù)合物在感染36小時(shí)內(nèi)促進(jìn)病增殖效果最強(qiáng)。
　　 本研究以4倍稀釋的免疫復(fù)合物處理PAM細(xì)胞，處理12h、24h、36h和48h后用相對(duì)熒光定量PCR方法分別檢測(cè)PAM細(xì)胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA水平，結(jié)果顯示，在處理24，36和48h時(shí)間段內(nèi)，免疫復(fù)合物均能降低IFN-α和IL-10的mRNA水平，但和正常細(xì)胞相比沒有明顯差異，而TNF-α的mRNA水平較

6、正常細(xì)胞略為升高。本試驗(yàn)以4倍稀釋的免疫復(fù)合物分別于感染前、感染后、或與病毒同時(shí)來處理PAM細(xì)胞，用相對(duì)熒光定量PCR方法分別檢測(cè)PAM細(xì)胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA水平。結(jié)果顯示，在感染48h后，免疫復(fù)合物能明顯升高PRRSV誘導(dǎo)的IFN-α和TNF-α的mRNA水平，但在36h前沒有明顯規(guī)律，而在各時(shí)間段內(nèi)，均能降低IL-10的mRNA水平。說明免疫復(fù)合物經(jīng)FcγR調(diào)節(jié)PRRSV誘導(dǎo)的細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄沒有明顯規(guī)律，這

7、可能是因?yàn)槊庖邚?fù)合物同時(shí)能與激活型和抑制型FcγR結(jié)合造成的。
　　 本研究用5倍稀釋鼠抗豬FcγRⅡB抗體封閉PAM細(xì)胞，經(jīng)PRRSV感染12h、24h、36h和48h后用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)感染細(xì)胞中病毒RNA，同時(shí)用相對(duì)熒光定量PCR方法分別檢測(cè)各組PAM細(xì)胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在感染12和24h時(shí)間段內(nèi)，封閉組中病毒復(fù)制水平略低于病毒感染組，但差異不顯著。而在感染36h時(shí)間

8、段內(nèi)，病毒的復(fù)制水平明顯升高，但在48h時(shí)間段內(nèi)，病毒的增殖與病毒感染組相比變化不明顯。說明FcγRⅡB的選擇性激活對(duì)PRRSV增殖的影響表現(xiàn)為先抑制后促進(jìn)。同時(shí)在病毒感染各時(shí)間段內(nèi)，封閉組中IFN-α和TNF-αmRNA水平均高于病毒感染組，而IL-10的mRNA水平則明顯下降，且顯著低于病毒感染組。說明FcγRⅡB的選擇性激活在PRRSV感染的免疫反應(yīng)中能增強(qiáng)抗病毒因子的水平。以上結(jié)果也說明PRRSV在細(xì)胞內(nèi)增殖可能并不完全與細(xì)胞內(nèi)