端粒穩(wěn)態(tài)失衡在多環(huán)芳烴復(fù)合物致肺癌中的作用.pdf

1、背景多環(huán)芳烴復(fù)合物(PAHs)已被世界衛(wèi)生組織確定為明確的人類致癌物,煉焦過程中產(chǎn)生的焦?fàn)t逸散物(COE)主要有害成分為PAHs,目前我國煉焦企業(yè)眾多,而且呈逐年增多趨勢,焦?fàn)t工肺癌的防治工作將會更為緊迫,然而,PAHs導(dǎo)致肺癌的機(jī)制仍然不十分清楚。人端粒是染色體末端具有保護(hù)功能的帽狀結(jié)構(gòu),它由“TTAGGG”重復(fù)片段和相關(guān)蛋白組成。端粒能避免正常染色體末端被錯誤地識別為DNA損傷。在正常細(xì)胞中,由于DNA復(fù)制機(jī)制不能完全復(fù)制端粒DNA

2、,因此,細(xì)胞每分裂一次,端粒就會有一些縮短。端粒酶是細(xì)胞內(nèi)能延長端粒序列從而彌補(bǔ)端粒損失的一種特殊酶。但是在人體內(nèi),端粒酶的表達(dá)是受嚴(yán)格調(diào)控的,事實(shí)上,絕大多數(shù)體細(xì)胞不具有端粒酶活力,因此,在細(xì)胞增殖分裂過程中端粒往往會逐漸縮短。其中一些細(xì)胞端?？s短到臨界長度,可被認(rèn)為雙鏈DNA斷裂損傷,并引起端粒功能紊亂,產(chǎn)生DNA的嚴(yán)重?fù)p傷和廣泛的染色體不穩(wěn)定。端粒功能紊亂在癌癥啟動和發(fā)展中有著非常重要的作用。POT1、TRF1和TRF2是3個主要

3、的端粒相關(guān)蛋白,用以調(diào)節(jié)端粒長度和端粒穩(wěn)態(tài)。因此,該研究選擇端粒長度、端粒酶活力,以及POT1、TRF1和TRF2表達(dá)等,分析它們在PAHs所致肺癌發(fā)展中的作用。
　　 目的探討端粒穩(wěn)態(tài)失衡在PAHs致肺癌中的作用。
　　 方法：人群流行病學(xué)研究選擇焦?fàn)t作業(yè)工人152例為暴露組,非焦?fàn)t作業(yè)工人125例為對照組,采集清晨空腹靜脈血,應(yīng)用SYBR Green I real time PCR方法檢測其外周血白細(xì)胞端粒長度、端粒

4、酶活力。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)以煤焦瀝青煙提取物、二甲基亞砜(DMSO)和生理鹽水作用后的BASE-2B細(xì)胞為研究對象,應(yīng)用SYBR Green I real time PCR方法檢測端粒長度、端粒酶活力,以及POT1、TRF1和TRF2 mRNA的表達(dá)變化；用免疫組化方法研究POT1、TRF1和TRF2的蛋白表達(dá)變化。采用管家基因GAPDH作為端粒DNA和端粒酶cDNAPCR檢測的歸一化內(nèi)參、TBP作為POT1、TRFl和TRF2 cDNA P

5、CR檢測的歸一化內(nèi)參。
　　 結(jié)果：人群流行病學(xué)研究:COE暴露組外周血白細(xì)胞與對照組相比較,以及暴露組的爐頂工組與爐側(cè)工組相比較,端粒DNA相對長度變短、端粒酶相對活力增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn):煤焦瀝青煙組第20代和第30代BASE-2B細(xì)胞,與DMSO溶劑組和生理鹽水組相比較,端粒DNA相對長度顯著縮短(P<0.01)、端粒酶相對活力顯著增高(P<0.01)；POT1、TRF1mRNA和蛋白水平