動(dòng)物組織病料中病原核酸提取技術(shù)研究與應(yīng)用.pdf

1、近年來(lái)，我國(guó)面臨的動(dòng)物疫病防控形勢(shì)十分嚴(yán)峻，外來(lái)動(dòng)物疫病跨境傳入風(fēng)險(xiǎn)極大。分子生物學(xué)技術(shù)以其快速、敏感、特異等優(yōu)點(diǎn)而在動(dòng)物疫病的檢測(cè)、確診工作中得到越來(lái)越多的應(yīng)用。動(dòng)物組織核酸（包括DNA和RNA）提取質(zhì)量是影響后續(xù)物種的分子鑒定、疫病分子生物學(xué)診斷及病原分類鑒定的重要因素。動(dòng)物檢疫工作中，分子生物學(xué)檢測(cè)方法的敏感性和特異性很大程度上決定于樣品前處理環(huán)節(jié)（即核酸提取過(guò)程）。本論文擬開(kāi)展動(dòng)物組織病料中病原核酸提取技術(shù)研究，以滿足口岸動(dòng)物檢

2、疫核酸快速抽提以及實(shí)驗(yàn)室分子生物學(xué)精準(zhǔn)檢測(cè)的需求。
　　本研究的內(nèi)容主要包括以下四個(gè)部分：
　　1、用酚抽提法、鹽洗法和TriZol法等比較常規(guī)的核酸抽提方法及試劑盒方法提取核酸。
　　2、在上述經(jīng)典方法的基礎(chǔ)上改進(jìn)組裝一種新的快速提取高質(zhì)量核酸的方法。
　　3、DNA提取應(yīng)用實(shí)例：以派琴蟲(chóng)感染的陽(yáng)性組織為模板，從組織液化、消化裂解細(xì)胞，最后純化整個(gè)流程對(duì)裂解液配方及工藝進(jìn)行優(yōu)化。將這些技術(shù)篩選組裝，確定DNA提

3、取一步法組合，結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)所建立方法提取的DNA進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。
　　4、RNA提取應(yīng)用實(shí)例：以滅活的小反芻獸疫病毒和口蹄疫病毒細(xì)胞培養(yǎng)物為材料模板，結(jié)合二氧化硅柱純化技術(shù)，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)所建立方法提取RNA的穩(wěn)定性及靈敏性。
　　綜上所述，本研究開(kāi)創(chuàng)性地建立了一種既能滿足口岸快速檢測(cè)需求，又能滿足實(shí)驗(yàn)室精準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)要求的提取核酸的方法。而且在國(guó)內(nèi)是首次開(kāi)展適于口岸快速、高靈敏檢測(cè)動(dòng)物組織樣品前