小白杏致腐拮抗菌的選育及保鮮應(yīng)用研究.pdf

1、軟腐病是小白杏貯藏期間的主要侵染性病害，是造成腐爛損失的重要原因。長(zhǎng)期以來(lái)，人們認(rèn)為防治果實(shí)采后病害最有效的方法是使用化學(xué)殺菌劑，但此方法存在著農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染和病原菌抗藥性等諸多弊端，迫切需要新的更安全的保鮮方法來(lái)取代化學(xué)殺菌劑。微生物防治是選擇對(duì)果實(shí)以及人體不造成危害的微生物，利用微生物之間的拮抗作用，達(dá)到抑制病原菌生長(zhǎng)的目的。
　　本研究分離鑒定出引起小白杏軟腐病的主要致病菌，針對(duì)此致病菌分離篩選出拮抗菌株BY11，并對(duì)拮

2、抗菌株進(jìn)行鑒定，將拮抗菌與氯化鈣和殼聚糖進(jìn)行復(fù)配，通過(guò)響應(yīng)面試驗(yàn)，優(yōu)選出一種復(fù)合生物保鮮劑，并驗(yàn)證了其在小白杏上的保鮮效果。主要結(jié)果如下：
　　1.軟腐病病原菌的分離和鑒定：從發(fā)病果實(shí)的病健交界處取樣，分離篩選出11株菌，依據(jù)柯赫氏法則，最終得到1株引起小白杏軟腐病的主要致病菌；應(yīng)用rDNA-ITS分子標(biāo)記分析和傳統(tǒng)真菌形態(tài)學(xué)鑒定相結(jié)合的方法，鑒定致病菌株為少孢根霉（Rhizopus oryzae）。
　　2.拮抗菌的分離和

3、篩選：用稀釋平板法，從果實(shí)表面、果實(shí)傷口、葉片以及果園根際土壤中共分離得到112個(gè)菌株。應(yīng)用平板對(duì)峙法，離體篩選出10株有拮抗作用的菌株。進(jìn)一步通過(guò)果實(shí)接種法，活體篩選出能明顯抑制少孢根霉的拮抗菌BY11和CA4，室溫下（約25℃）抑菌率分別為79.17％和66.67%。
　　3.拮抗菌的鑒定：首先采用傳統(tǒng)的鑒定方法，對(duì)BY11和CA4的表型、營(yíng)養(yǎng)特征和生理生化特性進(jìn)行了分類鑒定，進(jìn)而采用26SrDNA和16SrDNA分子鑒定方法

4、，通過(guò)同源性比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育分析，鑒定拮抗菌BY11為粘性圓紅酵母（Rhodotorula mucilaginosa），CA4為婁徹氏鏈霉菌（Streptomyces rochei）的變種。
　　4.拮抗菌BY11生長(zhǎng)曲線的測(cè)定：采用比濁法，在600nm波長(zhǎng)下測(cè)定菌液OD值，確定細(xì)胞濃度。研究BY11的生長(zhǎng)曲線、最適pH、最適溫度、最佳碳源、最佳氮源。實(shí)驗(yàn)得出拮抗菌BY11在培養(yǎng)48h時(shí)進(jìn)入穩(wěn)定期，最適生長(zhǎng)溫度為28℃，最適pH為6

5、，最佳碳源為蔗糖，氮源為尿素。
　　5．最佳保鮮劑的配制：將拮抗菌與氯化鈣和殼聚糖進(jìn)行復(fù)配,并確定貯藏溫度。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)，確定復(fù)合保鮮劑和溫度的因素水平。應(yīng)用響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)對(duì)保鮮劑進(jìn)行優(yōu)化配比，通過(guò)多元回歸分析，經(jīng)失擬項(xiàng)和決定系數(shù)檢驗(yàn)，證明模型可靠性較好。最終得出小白杏的最佳保鮮劑配方為：拮抗菌濃度為108CFU/ml，殼聚糖濃度為0.5%，氯化鈣濃度為1.5%；貯藏溫度為5℃。
　　6.保鮮劑的效果驗(yàn)證：采用保鮮劑處理小白杏