TR1基因雙元載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化.pdf

1、周曉燕：TRl基因雙元載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化目錄摘罷要iAbstractii符號說明iii第一章文獻綜述111弓I言j112高溫脅迫對油菜的影響l121高溫對油菜生長發(fā)育的影響2122高溫對油菜品質(zhì)及產(chǎn)量的影響2123高溫對油菜光合作用和呼吸作用的影響3124高溫對油菜生物膜和抗氧化系統(tǒng)的影響313TRl基因414轉(zhuǎn)基因作物中選擇標記基因的安全性4141植物基因轉(zhuǎn)化中常用的標記基因5142選擇標記基因去除的必要性6143選擇標記基因去除的方

2、法615轉(zhuǎn)基因油菜的檢測7151個體或組織水平上的檢測7152DNA水平上的檢測8153RNA水平上的檢測。9154蛋白質(zhì)水平上的檢測1016研究目的和意義10第二章材料與方法1121實驗材料11211植物材料11212質(zhì)粒及菌種11213實驗中主要使用的試劑及培養(yǎng)基。12214主要儀器設(shè)備1422TRl雙TDNA區(qū)雙元載體的構(gòu)建14221TRI基因的獲得14揚州大學碩士學位論文TR!基因雙元載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化摘要油菜(Brassica

3、napusL)是一種經(jīng)濟價值很高的作物，在食用植物油和飼用蛋白質(zhì)供給中發(fā)揮著非常重要的作用。隨著氣候變暖趨勢的不斷發(fā)展，高溫逼熟現(xiàn)象對油菜的品質(zhì)和產(chǎn)量負面影響越來越大。將耐熱基因TRl導入甘藍型油菜中，有望培育出抗高溫的轉(zhuǎn)基因油菜新品種。本研究以甘藍型油菜的下胚軸為外植體，研究了油菜遺傳轉(zhuǎn)化和再生的一些影響因素，并利用農(nóng)桿菌介導法將TRl基因?qū)胗筒?。主要工作和研究結(jié)果如下：1、建立并優(yōu)化了油菜下胚軸遺傳再生體系比較了2種常用的滅菌方法

4、，發(fā)現(xiàn)乙醇結(jié)合次氯酸鈉消毒法既能保證滅菌效果，又不會明顯降低油菜種子萌發(fā)率，更適合油菜種子滅菌。比較了油菜綠苗和黃化苗下胚軸的出愈率，發(fā)現(xiàn)前者較高。在對共培養(yǎng)和篩選的研究中發(fā)現(xiàn)，下胚軸在加了菌液的液體共培養(yǎng)基中共培養(yǎng)3天是較好的共培養(yǎng)方法；把共培養(yǎng)后的外植體先延遲培養(yǎng)4天，比直接進行篩選有更高的出愈率和芽再生率；另外，通過梯度實驗，抗生素濃度卡那霉素10mg／L，潮霉素25mg／L較為合適。2、轉(zhuǎn)TRl基因植株的獲得與鑒定對篩選得到的2