濟寧青山羊性早熟候選基因研究.pdf

1、縮短母羊的初情期，有助于降低后備母羊的生產(chǎn)投入成本。濟寧青山羊是一個性早熟、高繁殖力山羊品種。本研究旨在尋找新的與山羊性早熟有關(guān)的基因，了解其作用機制，期望能夠用于縮短山羊初情期的分子育種。
　　 1.根據(jù)牛UBA52基因序列，設(shè)計3對引物(U1～U3)，分別擴增隨機選取的濟寧青山羊和遼寧絨山羊基因組DNA，PCR產(chǎn)物克隆測序，序列比對。結(jié)果顯示僅在U3擴增產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)G63A和T181C突變。設(shè)計引物U4，利用PCR-RFLP技

2、術(shù)分別在性早熟、高繁殖力品種（濟寧青山羊、南江黃羊、馬頭山羊）和性晚熟、低繁殖力品種（遼寧絨山羊、內(nèi)蒙古絨山羊、太行山羊）中檢測上述位點的多態(tài)性，并分析2個突變位點對山羊性早熟和高繁殖力的影響。對于G63A位點，在濟寧青山羊和南江黃羊中檢測到GG、GA和AA3種基因型，在馬頭山羊、遼寧絨山羊、內(nèi)蒙古絨山羊、太行山羊中只檢測到GG和GA基因型;該突變位點不同基因型分布在性早熟品種和性晚熟品種間存在一定的差異;濟寧青山羊GG、GA和AA基因

3、型頻率分別為0.53、0.44、0.03，AA型和GA型母羊平均產(chǎn)羔數(shù)分別比GG型多0.85只(P＜0.05)和0.49只(P＜0.05)，AA型與GA型之間差異不顯著(P＞0.05)。對于T181C位點，在南江黃羊和內(nèi)蒙古絨山羊中檢測到CC、CT和TT3種基因型，在濟寧青山羊、馬頭山羊、遼寧絨山羊、太行山羊中只檢測到CC和CT兩種基因型;該突變位點不同基因型分布在性早熟品種和性晚熟品種間沒有明顯差異;濟寧青山羊CC和CT基因型頻率分別

4、為0.91和0.09，兩種基因型個體間產(chǎn)羔數(shù)差異不顯著(P＞0.05)。本研究結(jié)果初步表明，UBA52基因63位點與山羊的性早熟可能存在一定關(guān)聯(lián)，A等位基因可能是提高山羊產(chǎn)羔數(shù)的一個潛在有效的DNA標(biāo)記。
　　 2.根據(jù)牛GDH1基因序列，設(shè)計7對引物(P1～P7)，分別擴增隨機選取的濟寧青山羊和遼寧絨山羊基因組DNA，PCR產(chǎn)物克隆測序，序列比對結(jié)果顯示僅在P6的擴增產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)A197C突變。設(shè)計引物P8，利用PCR-RFLP

5、技術(shù)分別在性早熟、高繁殖力品種（濟寧青山羊、南江黃羊、馬頭山羊）和性晚熟、低繁殖力品種（遼寧絨山羊、內(nèi)蒙古絨山羊、太行山羊）中檢測上述位點的多態(tài)性，并分析該突變位點對山羊性早熟和高繁殖力的影響。對于A197C位點，在南江黃羊中只檢測到AA和AC基因型，而在其他5個品種中均檢測到AA、AC和CC3種基因型;該突變位點不同基因型分布在性早熟品種和性晚熟品種間存在一定的差異;濟寧青山羊AA、AC和CC基因型頻率分別為0.69、0.26、0.0

6、5，AA型母羊平均產(chǎn)羔數(shù)分別比CC型和AC型分別多0.54只（P＜0.05）和0.3只(P＜0.05)，AC型與CC型之間差異不顯著(P＞0.05)。本研究結(jié)果初步表明，GDH1基因197位點與山羊的性早熟可能存在一定關(guān)聯(lián)，A等位基因可能是提高山羊產(chǎn)羔數(shù)的一個潛在有效的DNA標(biāo)記。
　　 3.以幼年期Ⅰ(30±5d)、初情期(90±5d)的性早熟品種濟寧青山羊和幼年期Ⅰ(30±5d)、幼年期Ⅱ(90±5d)和初情期(160～18

7、0d)的性晚熟品種遼寧絨山羊為研究對象，通過實時熒光定量PCR技術(shù)，研究UBA52和GDH1基因在下丘腦、垂體、卵巢、子宮和腎上腺組織中的表達規(guī)律，探索UBA52和GDH1基因與山羊性早熟的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)UBA52基因在上述各發(fā)育階段5個組織均表達，且各發(fā)育階段時子宮中表達水平均極顯著高于其他組織（P＜0.01）。濟寧青山羊垂體中UBA52基因表達量在初情期時極顯著低于幼年期（P＜0.01），而遼寧絨山羊UBA52基因表達量在幼年期Ⅱ時