一株來源于商品牛血清的基因2型牛病毒性腹瀉病毒的分離鑒定及其序列分析.pdf

1、牛病毒性腹瀉/黏膜病(Bovine viral diarrhea-mucosal disease，BVD/MD)是由牛病毒性腹瀉病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus，BVDV)感染牛引起的以發(fā)熱、腹瀉、急、慢性黏膜病及懷孕母牛流產(chǎn)或產(chǎn)死胎、畸胎，持續(xù)性感染與免疫耐受為主要特征的一種傳染病，發(fā)病率高而死亡率低。近年來，該病的廣泛流行已經(jīng)給世界養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。BVDV不僅能引起動(dòng)物發(fā)病，還是生物制品(血清

2、、疫苗、干擾素)的主要污染源之一。由于商品血清常用于細(xì)胞培養(yǎng)，且很多細(xì)胞對(duì)BVDV較為易感，因此血清中若污染BVDV會(huì)給實(shí)驗(yàn)室診斷和相關(guān)研究造成很大的影響。
　　 本研究通過對(duì)某商品化血清中污染的BVDV進(jìn)行了連續(xù)傳代和蝕斑純化，分離得到純化的病毒，并命名為HLJ-10株。對(duì)分離得到的病毒進(jìn)行形態(tài)觀察、理化特性和相關(guān)生物學(xué)特性的研究。病毒在體外細(xì)胞嗜性研究表明該病毒在MDBK和BL細(xì)胞上生長狀態(tài)良好，能感染PK-15細(xì)胞，而不感

3、染MDCK、Vero和BHK-21細(xì)胞。通過對(duì)HLJ-10株和參考株NADL生長曲線的繪制，顯示前者病毒滴度低于后者，而病毒的復(fù)制特點(diǎn)和增殖特性基本相同。參考GenBank上己發(fā)表的BVDV全基因組序列，設(shè)計(jì)了覆蓋全基因組的數(shù)對(duì)引物，通過RT-PCR方法，對(duì)該毒株全基因組進(jìn)行分段克隆及序列測(cè)定。生物信息學(xué)分析表明，該毒株為BVDV基因2型，基因組全長12284個(gè)堿基，其中編碼區(qū)為11694 nt，共編碼3897個(gè)氨基酸，5’和3’非編碼