山東省禽源致病性大腸桿菌喹諾酮類藥物耐藥基因qnrS的PCR檢測及對其耐藥質(zhì)粒的耐藥性比較.pdf

1、喹喏酮類藥物廣泛應(yīng)用于治療全身感染性疾病，在國內(nèi)臨床用藥中其使用量位居第2位，僅次于β內(nèi)酰胺類抗生素。近年來，細(xì)菌對此類抗生素的耐藥率不斷上升，且已出現(xiàn)了同時(shí)耐其他藥物的多重耐藥菌株的流行，尤其在人醫(yī)和獸醫(yī)臨床常見的大腸桿菌中，喹諾酮類藥物的耐藥機(jī)制正變得日趨復(fù)雜。對大腸桿菌中的喹諾酮類藥物質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥基因進(jìn)行流行病學(xué)檢測與鑒定，有利于進(jìn)一步了解細(xì)菌耐喹喏酮類藥物的分子機(jī)理，指導(dǎo)臨床用藥。本研究主要包括以下內(nèi)容：
　　 1、大腸

2、桿菌喹諾酮類藥物耐藥基因qnr的流行性檢測
　　 為了解山東省禽源致病性大腸桿菌中質(zhì)粒攜帶喹諾酮類藥物耐藥基因的分布情況，對2004-2011年間分離的230株禽源致病性大腸桿菌進(jìn)行了qnrA、qnrB和qnrS基因的PCR檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)qnrS基因的檢出率為25.22％(58/230)，而qnrA和qnrB基因均未檢出。對24株檢出的qnrS基因測序后發(fā)現(xiàn)有16株為陽性(16/24)，8株為假陽性(8/24)，假陽性率較高。1

3、6株陽性菌株qnrS基因的序列與GenBankTM登錄號JF773350的序列同源性在98.1％～98.8％之間。16株陽性菌株的GenBankTM登錄號為JQ993348-JQ993363。為了提高檢測的特異性，本研究建立了檢測qnrS基因的套式PCR方法，測序結(jié)果表明該方法檢出準(zhǔn)確率為100％，證明套式PCR方法檢測qnrS基因徹底消除了普通PCR檢測的非特異性問題。使用該方法檢出230株細(xì)菌中qnrS基因的攜帶率為16.52％(3

4、8/230)，表明攜帶qnrS基因的耐藥質(zhì)粒在山東省禽源致病性大腸桿菌中分布較為廣泛。
　　 2、喹諾酮類藥物耐藥質(zhì)粒的分離鑒定及其介導(dǎo)耐藥性的比較
　　 根據(jù)試驗(yàn)一的結(jié)果，選取EDFF、YDA38、MJ071107、TZ-A、ED127、ED437、TAJ-1和ED039等8株大腸桿菌，采用堿裂解法提取質(zhì)粒，并將提取的質(zhì)粒連續(xù)轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α三次，以保證其穩(wěn)定遺傳。結(jié)果8株細(xì)菌均提取出了耐藥質(zhì)粒，通過試驗(yàn)一的PCR

5、方法檢測，結(jié)果均為qnrS基因檢測陽性。采用WHO推薦的紙片法對轉(zhuǎn)化后的DH5α與空白DH5α進(jìn)行33種藥物敏感性實(shí)驗(yàn)藥敏試驗(yàn)，采用CLSI推薦的微量肉湯稀釋法對攜帶耐藥質(zhì)粒的DH5α與DH5α進(jìn)行了環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、諾氟沙星和加替沙星等四種喹諾酮藥物的最低抑菌濃度(MIC)的比較測定。結(jié)果顯示攜帶耐藥質(zhì)粒的DH5α的對喹諾酮類藥物的耐藥性由敏感轉(zhuǎn)增至中介(WHO推薦的比較標(biāo)準(zhǔn))，環(huán)丙沙星和諾氟沙星，左氧氟沙星和諾氟沙星的MIC值增