山東省禽源大腸桿菌血清型鑒定及喹諾酮類藥物耐藥性研究.pdf

1、在臨床獸醫(yī)上,大腸桿菌病造成的危害十分嚴(yán)重,特別是禽大腸桿菌病,由于其臨床癥狀復(fù)雜、病理特征多樣,一直是困擾養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的常見病。近年來,集約化養(yǎng)殖使主要疾病得到基本控制后,大腸桿菌病呈明顯上升趨勢,已成為養(yǎng)殖業(yè)主要細(xì)菌性疾病之一。
　　 1、2003—2009年山東省禽源大腸桿菌血清型鑒定
　　 2003年以來,自山東省不同地區(qū)的規(guī)?；B(yǎng)雞場和養(yǎng)鴨場具有典型大腸桿菌病臨床癥狀和病理變化的病禽中分離鑒定出214株大腸桿菌,

2、應(yīng)用微量平板凝集試驗(yàn)共鑒定出200株分離菌的O抗原血清型,分別屬于14個血清型,其中O78、O88、O2、O35和O18為主要優(yōu)勢血清型,占總分離菌株的82.7％,而O3血清型在我國禽類中還未見報道過。
　　 2、禽源大腸桿菌普通藥敏試驗(yàn)及最低抑菌濃度(MIC)測定
　　 采用WHO推薦的紙片法對分離鑒定的214株大腸桿菌進(jìn)行6種喹諾酮類藥物敏感性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明:分離菌存在廣泛的耐藥性,49.5％的菌株對6種藥物均有耐藥

3、性。6種藥物中最為敏感的是左氧氟沙星,耐藥率為71.5％,而培氟沙星最不敏感,耐藥率為92.1％,環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星及洛美沙星的耐藥率分別為為77.1％、79.0％、81.8％和88.8％。鴨源大腸桿菌耐藥率(60.4％)要明顯高于雞源大腸桿菌的耐藥率(41.5％)。從2003年到2009年大腸桿菌耐藥率逐年上升,而且不同地區(qū)敏感藥物差異較大,各地區(qū)均有敏感藥物和耐受藥物。
　　 采用CLSI推薦的微量肉湯稀釋法對21

4、4株大腸桿菌進(jìn)行了乳酸環(huán)丙沙星和乳酸諾氟沙星的最低抑菌濃度(MIC)的測定,結(jié)果表明乳酸環(huán)丙沙星耐藥率為87.4％,乳酸諾氟沙星耐藥率為89.3％。
　　 3、喹諾酮類耐藥基因克隆測序及規(guī)律的分析
　　 根據(jù)乳酸諾氟沙星和乳酸環(huán)丙沙星這兩種藥物的MIC,選取不同抑菌濃度的47株大腸桿菌,對其基因組上耐藥基因gyrA、gyrB、parC和parE進(jìn)行了PCR擴(kuò)增及測序分析。與GenBank公布的序列進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)氨基酸差異

5、:(1)gyrA基因83位Ser突變?yōu)長eu,87位Asp突變?yōu)锳sn；(2)gyrB基因491基因Ser突變?yōu)锳sn,但沒發(fā)現(xiàn)突變規(guī)律；(3)parC80位Ser突變?yōu)镮le,84位點(diǎn)Glu→Gly；(4)parE突變較少見,僅在458位Ser突變?yōu)锳la和Thr。gyrA基因突變是對喹諾酮類藥物耐藥的主要因?yàn)?是首要靶位點(diǎn)；parC基因突變可能在對喹諾酮抗菌藥物高水平耐藥的形成中起輔助性作用,是第二靶位點(diǎn)；gyrB基因單突變對喹諾酮