臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氟喹諾酮類抗菌藥物耐藥性檢測(cè)和耐藥基因研究.pdf

1、引言：環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星等氟喹諾酮類藥物常用于革蘭陰性桿菌感染的治療，隨著該類藥物臨床應(yīng)用的增多，近年來鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氟喹諾酮類藥物的耐藥越來越嚴(yán)重。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氟喹諾酮類藥物耐藥的主要機(jī)制有兩種，一是氟喹諾酮類藥物靶位的改變；二是細(xì)胞膜通透性的改變或（和）泵出機(jī)制的過分表達(dá)。且細(xì)菌耐藥性可以通過垂直或水平傳播等方式進(jìn)行播散。本研究通過對(duì)安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院分離的鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氟喹諾酮類抗菌藥物的耐藥性分析，

2、對(duì)常見耐藥基因的檢測(cè)，了解本地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氟喹諾酮類抗菌藥物的耐藥情況，探討細(xì)菌耐藥的分子生物學(xué)機(jī)制，為本地區(qū)開展鮑曼不動(dòng)桿菌感染的防治、耐藥的監(jiān)測(cè)、傳染源的追蹤及傳播途徑調(diào)查等工作提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　 目的：調(diào)查醫(yī)院臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌的分布和耐藥性，了解鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氟喹諾酮類抗菌藥物的常見耐藥基因型別和分子機(jī)制，為臨床抗感染治療提供依據(jù)，以指導(dǎo)臨床合理用藥。
　　 方法：采用VITEK系統(tǒng)鑒定細(xì)菌，采用Ki

3、rby-Bauer紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，并用M-H瓊脂定量稀釋法測(cè)定菌株對(duì)左氧氟沙星、環(huán)丙沙星和加替沙星三種氟喹諾酮類藥物的MIC，PCR擴(kuò)增gyrA基因、parC基因和質(zhì)粒上的qnrA、B、S、氨基糖苷類修飾酶aac(6’)-Ib及外排泵qepA基因，選取部分PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析。結(jié)果按照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSL/NCCLS2008版) 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷。應(yīng)用 WHONET 5.3軟件分析臨床標(biāo)本所分離的病原菌的分

4、布情況和藥敏結(jié)果。
　　 結(jié)果：從2007年10月到2009年10月，臨床標(biāo)本共檢出120株鮑曼不動(dòng)桿菌，多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌占臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌的80.0％(96/120)，中心重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)、呼吸科病房、急救中心分離菌所占比率分別為28.3％、24.2％、12.5％。鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)環(huán)丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星的耐藥率分別為78.3 ％、58.3 ％和40.0％。PCR基因擴(kuò)增和測(cè)序結(jié)果：所有菌株均擴(kuò)增出了相應(yīng)gyr

5、A和parC基因產(chǎn)物，氨基糖苷類修飾酶aac(6’)-Ib陽性率達(dá)29.2％（35/120），但通過測(cè)序并未證實(shí)新氨基糖苷類修飾酶aac(6’)-Ib-Cr的存在，未檢測(cè)出質(zhì)粒上的qnrA、B、S及外排泵qepA基因產(chǎn)物；耐藥株中的gyrA基因存在83位氨基酸密碼子突變，敏感株中則不存在該突變，并在耐藥株中發(fā)現(xiàn)gyrA和parC基因針對(duì)Genbank號(hào)分別為DQ270238和EU977576的菌株存在新的點(diǎn)突變。
　　 結(jié)論：合