BmGlcNAcase2特性及其與BmNPV抗性的關(guān)系研究.pdf

1、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（GlcNAcase）是一種常見的糖基水解酶，廣泛存在于包括人類、動(dòng)物、植物和真菌等多種生物體內(nèi)，主要以游離的狀態(tài)分布于溶酶體中。昆蟲中存在的GlcNAcase不同于其他生物，有兩種存在形式，即游離于溶酶體的形式和附著于高爾基體膜的形式，并且兩種形式的酶的作用機(jī)制有些差異。附著于高爾基體膜的酶可能是導(dǎo)致昆蟲中糖蛋白上糖基相對(duì)于哺乳動(dòng)物中的糖基簡單的原因。而糖基化對(duì)于蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性和穩(wěn)定性至關(guān)重要。
　

2、　我們之前通過二維電泳分析家蠶核型多角體病毒(BmNPV)抗感性品種蛋白質(zhì)組差異時(shí)，檢測(cè)到一些差異點(diǎn)，其中之一經(jīng)質(zhì)譜鑒定是家蠶β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶中的一種，即BmGlcNAcase2。我們推測(cè)BmGlcNAcase2可能在家蠶抵抗BmNPV侵染過程中起到一定的作用，可能是過高的BmGlcNAcase2活性使得病毒侵染過程中關(guān)鍵病毒糖蛋白的糖基化發(fā)生變化而影響其感染力，導(dǎo)致抗性品種產(chǎn)生抗性。為了進(jìn)一步驗(yàn)證以上假設(shè)，我們進(jìn)行了以下幾個(gè)

3、實(shí)驗(yàn)。
　　為了確定家蠶抗感性品種中BmGlcNAcase2的不同，我們使用PCR、qPCR、western blotting等方法，比較了抗感性家蠶中BmGlcNAcase2的編碼區(qū)序列差異、中腸組織中轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)量差異、三種組織（中腸、血淋巴和脂肪體）中蛋白水平表達(dá)量的差異以及血淋巴中酶活性的差異。結(jié)果顯示兩個(gè)品種中編碼區(qū)序列沒有明顯差異;轉(zhuǎn)錄水平上抗性家蠶中腸中表達(dá)量更高;蛋白水平上，抗性家蠶中腸和血淋巴中表達(dá)量更高;酶活

4、測(cè)定結(jié)果顯示抗性家蠶中的酶活顯著高于易感性家蠶。結(jié)果表明，抗感性家蠶品種中BmGlcNAcase2的特征存在明顯差異，為進(jìn)一步研究家蠶BmNPV抗性與BmGlcNAcase2的關(guān)系提供依據(jù)。
　　接下來的實(shí)驗(yàn)中我們使用RNAi和酶活性抑制劑在BmN細(xì)胞中抑制BmGlcNAcase2的酶活性后，進(jìn)行病毒感染，研究病毒感染力的變化。并利用二維電泳技術(shù)分析BmGlcNAcas2酶活抑制后細(xì)胞的糖蛋白的糖基化變化、病毒糖蛋白的糖基化變化。