食物中氨基酸的測定方法

1、<p>　　食物中氨基酸的測定方法（1）</p><p>　　一、氨基酸自動分析儀法 1. 原理 食物蛋白質經(jīng)鹽酸水解成為游離氨基酸，經(jīng)氨基酸分析儀的離子交換柱分離后，與茚三酮溶液產(chǎn)生顏色反應，再通過分光光度計比色測定氨基酸含量。一份水解液可同時測定天冬，蘇，絲，谷，脯，甘，丙，纈，蛋，異亮，亮，酪，苯丙，組，賴和精氨酸等16種氨基酸，其最低檢出限為10pmol。 2. 適用范圍

2、 GB/T14965-1994食物中氨基酸的測定方法。 本法適用于食物中的16種氨基酸的測定。其最低檢出限為10pmol。本方法不適用于蛋白質含量低的水果、蔬菜、飲料和淀粉類食物的測定 3. 儀器和設備 3.1 真空泵 3.2 恒溫干燥箱 3.3 水解管：耐壓螺蓋玻璃管或硬質玻璃管，體積20～30ml。用去離子水沖洗干凈并烘干。 3.4 真空干燥器（溫度可調節(jié)） 3.5 氨基酸自動分析儀。 4. 試劑 全部試劑

3、除注明外均為分析純，實驗用水為去離子水。 4.1 濃鹽酸：優(yōu)級純 4.2 6mol/L鹽酸：濃鹽酸與水1：1混合而成。 4.3 苯酚：需重蒸餾。 4.4 混合氨基酸標準液（儀器制造公司出售）：0.00</p><p><b>　　氨基酸標準峰面積 </b></p><p>　　所以，100g樣品中氨基酸的mg 數(shù)=

4、 上機樣品液中氨基酸量（nmol）×f ×Mr×100 </p><p>　　m×V×106 式中 f--樣品的稀釋倍數(shù) Mr--氨基酸的相對分子量 m--樣品質量（g） V--上機時的進樣量（此處為50μL） 7.其他 7.1 測定條件（以Beckman-6300型氨基酸自動分析儀為例）

5、緩沖液流量：20mL/h； 茚三酮流量：10mL/h； 柱溫：50、60和70℃； 色譜柱：20cm； 分析時間：42min。 7.2 標準出峰順序和保留時間 序號 出峰順序 保留時間/min 序號 出峰順序 保留時間/min 1 天冬氨酸 5.55 9 蛋氨酸 19.63 2 蘇氨酸 6.60 10 異亮氨酸 21.24

6、3 絲氨酸 7.09 11 亮氨酸 22.06 4 谷氨酸 8.72 12 酪氨酸 24.52 5 脯氨酸 9.63 13 苯丙氨酸 25.76 6 甘氨酸 12.24 14 組氨</p><p>　　7.3允許差： 同實驗室平行測定或連續(xù)兩次測定結果相對偏差絕對值≤12

7、%。 </p><p>　　食物中氨基酸的測定方法（2）</p><p>　　二、食物中胱氨酸的測定方法---氨基酸自動分析儀法（過甲酸氧化） 1. 原理 在用鹽酸水解蛋白質的過程中，胱氨酸易被破壞，現(xiàn)多采用過甲酸氧化法將蛋白質中的胱氨酸及半胱氨酸氧化成半胱磺酸，其反應如下： SH NH2 O SO3H NH2

8、 O </p><p>　　CH2 CH COOH + 3H C OOH CH2 CH COOH + 3H C OH </p><p>　　半胱氨酸 過甲酸 半胱磺酸 甲酸 </p><p>　　生成的半胱磺酸可在氨基酸自動分析儀上進行測定，與標準半胱磺酸比較，計算其含量。 2. 適用范圍

9、 參照中國預防醫(yī)學科學院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所編寫的食物營養(yǎng)成分測定法第三版。適用于食物中胱氨酸的測定。 3. 儀器 水解瓶：耐壓螺蓋玻璃管或硬質試管，體積20～30mL，用去離子水沖凈并烘干，電熱減壓蒸發(fā)器。 4. 試劑 過甲酸：取9mL分析純甲酸加入1mL30%過氧化氫混合，在室溫放置2小時以上。 5. 操作步驟 5.1 過甲酸氧化：稱取一定量的食物樣品置于水解瓶中，使樣品含蛋白質在5～10mg，加入1

10、mL過甲酸試劑，在室溫放置3小時。加1mL乙醇終止氧化。將樣品瓶置于電熱減壓器中，于45℃減壓蒸干，用1mL去離子水淋洗瓶壁，再蒸干，反復3次，以除去過甲酸。 5.2 鹽酸水解：同食物中氨基酸（16種）測定方法 5.3 在Bekman6300氨基酸自動分析儀上，在注文50℃時用pH3.25檸檬酸緩沖液洗脫，半胱磺酸的出峰時間約在1.78分鐘。 6. 計算 </p><p>　　上機標準液中半胱磺酸量（

11、nmol）×樣品峰面積</p><p>　　上機樣品液（50μl）中半胱磺酸量=</p><p>　　半胱磺酸標準峰面積 上機樣品中半胱磺酸量（nmol）×D×M×100 </p><p>　　100

12、g樣品中胱氨酸mg數(shù)=</p><p>　　W×E×106×2 式中 D：樣品稀釋倍數(shù) M：胱氨酸分子量（ng） W：稱樣量（g） E：上機時的進樣量（此處為50μl） </p><p>　　食物中氨基酸的測定方法（3）</p><p>　　三、食物中色氨酸的測定--熒光分光光度法 1. 原理 食物中蛋白質在酸

13、水解過程中，其色氨酸極易被分解，本法用堿水解蛋白質，直接測定色氨酸的天然熒光。在蛋白質水解液中，只有色氨酸和酪氨酸可以檢測到熒光。在pH為11時，色氨酸的熒光強度比酪氨酸大100倍，且兩種氨基酸的熒光峰相差40多nm，利用此特點，可在有大量酪氨酸的存在下，檢測色氨酸的含量。 2 適用范圍 參照中國預防醫(yī)學科學院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所編寫的食物營養(yǎng)成分測定法第三版。適用于食物中色氨酸的測定。 3.儀器 3.1熒光分光光度計

14、 3.2減壓蒸發(fā)器 3.3螺旋蓋大口瓶（瓶蓋要有橡皮墊） 3.4聚四氟乙烯管 3.5小玻璃球 3.6烘箱 4.試劑 （1）5mol/L NaOH：內(nèi)含0.5%可溶性淀粉，臨用前配制。 （2）4mol/L 尿素（pH=11） （3） 6mol/L鹽酸 （4） 溴百里酚藍指示劑：稱取0.1g溴百里酚藍加0.1mol/L氫氧化鈉1.6ml，配成0.05%水溶液。 （5） 高純氮（含量99.999%） （6） 辛醇甲苯溶