雞糞抑氨菌的分離、鑒定及其制劑的研究.pdf

1、隨著我國蛋雞養(yǎng)殖業(yè)規(guī)?；图s化程度的快速提高，蛋雞生產(chǎn)過程中所產(chǎn)生的氨等惡臭氣體對雞體健康和環(huán)境的影響也日趨嚴重。氨具有刺激性氣味、高濃度時會強烈刺激動物的呼吸道黏膜、眼結(jié)膜和眼角膜，損傷動物的呼吸系統(tǒng)和眼睛，甚至影響消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)，從而導致畜禽生產(chǎn)性能下降，給養(yǎng)殖業(yè)造成很大的經(jīng)濟損失。如何有效控制雞舍內(nèi)氨的濃度，減少其對蛋雞生產(chǎn)和環(huán)境的危害，已經(jīng)引起業(yè)界的高度重視，人們開始嘗試各種控制氨氣濃度的方法。利用微生物抑制雞糞

2、中氨釋放是目前發(fā)展起來的廉價而有效的氨氣控制方法，倍受業(yè)界關注。為此，本研究從不同環(huán)境分離源中分離到兩株抑氨菌株，通過形態(tài)學、分子生物學、生理生化鑒定和16 SrDNA系統(tǒng)發(fā)育分析，確定其分類學地位，并進行抑氨作用和抑氨菌固態(tài)制劑的研究。
　　 1.雞糞和土壤中抑氨菌的分離純化及鑒定。為了獲得對雞糞有抑氨效果的抑氨菌并確定菌株的分類地位，分別以雞糞和土壤為分離源，用含氨富集培養(yǎng)液對抑氨菌進行了富集培養(yǎng)，以篩選培養(yǎng)基平板進行了分離

3、純化，并甲醛法以進行了初篩，以三角瓶內(nèi)的抑氨試驗進行了復篩，并對其進行了形態(tài)學觀察、分子生物學和生理生化鑒定。結(jié)果表明，分別從雞糞和土壤中獲得的菌株J16和T26，都具有高效的抑氨作用，在30℃恒溫條件下它們的抑氨效果最高分別為74.11％和51.35％。菌株J16和 T26與乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的同源性分別為100％和99％，因此把這兩株抑氨

4、菌分別命名為乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)B3菌和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)A3菌。
　　 2.抑氨菌的抑氨作用研究。雞糞中最主要的含氮物質(zhì)尿酸能分解為尿囊素和尿素等化合物，為了研究枯草芽孢桿菌A3菌的抑氨作用，以含尿酸培養(yǎng)基對雞糞中的產(chǎn)氨菌進行富集、分離，以尿酸、尿囊素和尿素分別作唯一氮源的培養(yǎng)基檢測產(chǎn)氨菌以這3種含氮物質(zhì)作氮源的生長情況，以紙片法在產(chǎn)氨菌富集培養(yǎng)基平板上

5、測定枯草芽孢桿菌A3菌對產(chǎn)氨菌的抑菌圈大小。結(jié)果表明，分離到的19株產(chǎn)氨菌中，全部都能在尿酸培養(yǎng)基上生長，17株能在尿囊素培養(yǎng)基上生長，18株能在尿素培養(yǎng)基上生長，枯草芽孢桿菌 A3菌對17株產(chǎn)氨菌有明顯的抑制生長的作用。根據(jù)結(jié)果推測，絕大多數(shù)產(chǎn)氨菌能利用不同的含氮物質(zhì)產(chǎn)生氨氣，枯草芽孢桿菌 A3菌能通過抑制產(chǎn)氨菌的生長達到抑制雞糞氨釋放的目的。
　　 3.抑氨菌固態(tài)制劑的研究。為了將枯草芽孢桿菌A3菌和乳酸片球菌B3菌制成抑氨

6、菌固態(tài)制劑并研究其抑氨效果，以麥麩、麥秸、麥糠、稻草、稻殼、玉米芯和鋸末為載體物質(zhì)，經(jīng)粉碎干燥后通過組合得到63種組合載體，測定各組合載體的吸水率后，吸收混合菌液制成抑氨菌固態(tài)制劑，經(jīng)過3天的抑氨效果測定后，選擇抑氨效果最佳的固態(tài)制劑，研究了其載體吸收氨和菌體、菌劑抑氨的效果。結(jié)果表明，由等量麥糠、稻殼和玉米芯混合載體吸收200％(v/w)混合菌液后制成的固態(tài)制劑抑氨效果最佳為82.5％，明顯高于混合菌液的抑氨效果72.09％。固態(tài)制劑