抑雞白痢沙門氏菌的細(xì)菌素產(chǎn)生菌及其產(chǎn)物特性的研究.pdf

1、雞白痢沙門氏菌是引起雞白痢的病原菌，在家禽養(yǎng)殖業(yè)中可造成一定比例的病雞或帶菌雞，從而帶來經(jīng)濟(jì)損失，因而對抑雞白痢沙門氏菌的細(xì)菌素產(chǎn)生菌的研究有重要的應(yīng)用價值。 本研究從植物源材料中篩選到了一株可抑制雞白痢沙門氏菌生長的產(chǎn)細(xì)菌素菌株V528。首先對該菌株和所產(chǎn)細(xì)菌素的生物特性進(jìn)行了研究。為了提高細(xì)菌素的效價，進(jìn)一步利用紫外線誘變菌株以篩選高產(chǎn)菌株和利用發(fā)酵實(shí)驗(yàn)以優(yōu)化發(fā)酵條件，并對所獲細(xì)菌素進(jìn)行了初步的純化。 菌株V528對

2、部分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌有較強(qiáng)的抑制作用，根據(jù)其形態(tài)及生理生化特征，參照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》和《乳酸菌分類鑒定及實(shí)驗(yàn)方法》，最終確認(rèn)該細(xì)菌可歸為乳酸乳球菌屬(Lactococcuslactis)。 在排除酸性產(chǎn)物和過氧化氫的干擾后，V528菌株的發(fā)酵液對雞白痢沙門氏菌仍具有明顯的抑菌效果。發(fā)酵液經(jīng)胃蛋白酶處理后，其抑菌活性明顯下降，證明該活性物質(zhì)具有蛋白質(zhì)性質(zhì)為細(xì)菌素。 對V528菌株進(jìn)行紫外線二次復(fù)合誘變，篩選

3、得到三株細(xì)菌素產(chǎn)量提高且遺傳相對較穩(wěn)定的菌株，其中Lact.174菌株的細(xì)菌素活性較V528的細(xì)菌素活性增加61.54％，從而確定該菌株為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究用菌。 對Lact.174菌株的發(fā)酵條件的研究表明，Lact.174菌株發(fā)酵產(chǎn)生細(xì)菌素的最佳培養(yǎng)基為MRS。本文還研究了培養(yǎng)溫度，培養(yǎng)基起始pH值，培養(yǎng)基碳源、氮源，刺激因子等因素對細(xì)菌素產(chǎn)量的影響。組合因素優(yōu)化結(jié)果為：蔗糖20g,牛肉浸膏10g，酵母粉5.0g，磷酸氫二鉀2.0

4、g，檸檬酸二銨2g，乙酸鈉5g，吐溫-805mL，PEG-60001g，乙醇10ml，乙酸0.05ml，定容至1L，起始pH為5.5，以6小時種齡的菌種接種量為2％，30℃培養(yǎng)14h。在此培養(yǎng)條件下細(xì)菌素效價可達(dá)到8147.04IU/ml，與起始培養(yǎng)基相比細(xì)菌素效價提高了1.4倍。 菌株發(fā)酵上清液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮，用丙酮提取，采用考馬斯亮蘭試劑盒測定蛋白質(zhì)含量，不同批次提取的蛋白含量在0.75～1.52mg/ml之間，通過T