運(yùn)用超低溫技術(shù)脫除梨離體植株潛隱病毒研究.pdf

1、蘋果褪綠葉斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV)、蘋果莖溝病毒(Applestem grooving virus，ASGV)和蘋果莖痘病毒(Apple stem pitting virus，ASPV)是梨樹(shù)上的3種主要潛隱病毒，在我國(guó)梨樹(shù)上發(fā)生普遍，常導(dǎo)致梨樹(shù)生長(zhǎng)勢(shì)及果品產(chǎn)量和質(zhì)量下降。目前尚未發(fā)現(xiàn)這三種潛隱病毒的自然傳播介體，它們主要是通過(guò)無(wú)性繁殖材料和種苗調(diào)運(yùn)傳播。培育無(wú)病毒種苗、發(fā)展無(wú)

2、病毒栽培是防治梨病毒病病害的有效途徑。目前應(yīng)用較廣泛的植物病毒脫除方法包括莖尖培養(yǎng)、熱處理和化學(xué)處理，近些年來(lái)，超低溫處理已在多種植物病毒的脫除中得到應(yīng)用，該方法相比傳統(tǒng)的熱處理和化學(xué)處理等方法，具有操作簡(jiǎn)單、快速和成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。為構(gòu)建適合我國(guó)不同梨種質(zhì)的病毒脫除技術(shù)體系，本研究以帶有潛隱病毒的梨離體植株為材料，對(duì)超低溫處理參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，同時(shí)對(duì)其脫病毒效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
　　 1.2010年分別從湖北果茶所、山東煙臺(tái)農(nóng)科院和華

3、中農(nóng)業(yè)大學(xué)等地采集18個(gè)梨樣品的枝條，采用RT-PCR方法對(duì)ACLSV、ASGV和ASPV進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明除湖北康佛倫斯樣品沒(méi)有檢測(cè)到病毒外，其它樣品至少帶一種潛隱病毒。其中4個(gè)樣品帶有這3種病毒，12個(gè)樣品帶有ASGV和ACLSV或ASGV和ASPV。
　　 2.對(duì)所收集的梨樣品進(jìn)行了莖尖分離培養(yǎng)，獲得了14個(gè)品種的離體培養(yǎng)植株。研究發(fā)現(xiàn)不同梨品種的莖尖培養(yǎng)成活率存在明顯差異，并與各品種所屬梨系統(tǒng)有關(guān)。其中7個(gè)沙梨品種的離

4、體莖尖成活率相對(duì)較高，為50%-100%；西洋梨成活率相對(duì)較低為0-40%；兩個(gè)白梨品種成活率分別為57.4%和81.25%；1個(gè)秋子梨系統(tǒng)品種南果的成活率為46.67%。
　　 3.以沙梨品種真渝離體植株為材料，對(duì)影響超低溫處理后莖尖存活的三個(gè)關(guān)鍵因子.預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、裝載時(shí)間及玻璃化溶液的處理時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明，玻璃化溶液處理時(shí)間對(duì)超低溫處理后的莖尖成活率影響最大，預(yù)培養(yǎng)2d、裝載20min及玻璃化溶液PVS2處理90～1

5、00 min可有效降低莖尖死亡率。采用該技術(shù)體系，對(duì)4個(gè)沙梨品種離體植株進(jìn)行超低溫處理，對(duì)獲得再生植株。進(jìn)行病毒檢測(cè)的結(jié)果表明，超低溫處理對(duì)不同沙梨品種的病毒脫除效率存在差異，中梨1號(hào)脫毒效率最高，達(dá)100%，而黃金梨和鄂梨2號(hào)的病毒均未能完全脫除。
　　 4.根據(jù)以上結(jié)果，分別將變溫?zé)崽幚?80C/32℃(16h/8h)30d及化學(xué)處理(20mg/L病毒醚；30d、40d)與超低溫處理結(jié)合，分析比較其脫除病毒效果。結(jié)果表明，不

6、同品種離體植株在熱處理過(guò)程中的生長(zhǎng)狀況與超低溫處理后莖尖存活率存在相關(guān)性。紅貝蕾莎和圓黃離體植株受熱處理影響最小，超低溫處理后莖尖成活率高達(dá)85.0%；而美人酥受熱處理影響最大，超低溫處理后莖尖成活率最低，僅有40%。不同品種病毒脫除效率也存在差異，其中圓黃的病毒脫除效率最高，為90%，其次為豐水和紅貝蕾莎，雪花梨和美人酥的病毒脫除效率最低，僅有20%。不同病毒的脫除效率也存在較大差異，其中ASPV脫除率達(dá)100%，ASGV的脫除效率為