大豆花器官優(yōu)勢表達基因GmMYB181的克隆及功能研究.pdf

1、大豆(Glycinemax(L.)Merr.）是一種重要的經(jīng)濟作物，為人類提供豐富的油料和優(yōu)質(zhì)的蛋白。生殖性狀的發(fā)育是農(nóng)產(chǎn)品形成的基礎(chǔ)，直接影響到其產(chǎn)量和品質(zhì)，因此花器官發(fā)育分子調(diào)控機制的研究對大豆種質(zhì)改良具有重要意義。MYB轉(zhuǎn)錄因子是最大的植物轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，參與植物的發(fā)育、激素信號傳導、次級代謝的調(diào)控、生物和非生物脅迫的應(yīng)答等，對花等器官形態(tài)建成具有重要的調(diào)節(jié)作用。
　　本研究通過基因芯片技術(shù)從大豆的花中鑒定的多個花器官

2、優(yōu)勢表達基因，選擇其中1個編碼MYB轉(zhuǎn)錄因子的基因片段（Gma.18002.1.S1_at）進一步研究。將該基因片段進行EST拼接，序列比對發(fā)現(xiàn)其為NCBI網(wǎng)站上已命名的基因GmMYB181(DQ822906)。本研究進一步分離克隆GmMYB181基因cDNA全長序列，通過組織表達分析、亞細胞定位、酵母系統(tǒng)檢測其轉(zhuǎn)錄激活活性、轉(zhuǎn)基因擬南芥等方法對該基因的功能進行初步分析。
　　主要結(jié)果如下:
　　1.GmMYB181基因的克

3、隆及序列分析
　　從大豆花中克隆得到GmMYB181基因的cDNA全長序列，包含一個長為624bp的開放閱讀框，編碼208個氨基酸。系統(tǒng)進化分析表明，GmMYB181與其他物種的MYB蛋白如三花龍膽GtMYB、葡萄VvMYB24以及擬南芥中AtMYB21和AtMYB24親緣關(guān)系比較近。
　　2.GmMYB181基因的表達特性分析
　　利用實時熒光定量PCR及半定量RT-PCR分析GmMYB181基因在大豆各組織器官中的

4、表達情況。結(jié)果顯示GmMYB181基因在大豆花器官中特異性表達，在營養(yǎng)器官中不表達。亞細胞定位結(jié)果表明GmMYB181蛋白定位于細胞核中，可能具有轉(zhuǎn)錄激活活性。
　　3.轉(zhuǎn)基因擬南芥表型分析
　　用Gateway技術(shù)體系構(gòu)建GmMYB181基因的植物過表達載體，利用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化擬南芥。將GmMYB181在擬南芥中異源表達，發(fā)現(xiàn)35S∷GmMYB181轉(zhuǎn)基因擬南芥出現(xiàn)花萼卷曲、長角果較短小、植株矮化等變異性狀。這些結(jié)果說明