芝麻枯萎病的病原菌鑒定及其基于內(nèi)生細(xì)菌的生物防治研究.pdf

1、芝麻是我國重要的油料作物之一。近年芝麻枯萎病嚴(yán)重發(fā)生,導(dǎo)致芝麻產(chǎn)量減產(chǎn)嚴(yán)重,并造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。明確該病的病原菌是尋找有效防治措施的基礎(chǔ)。作者經(jīng)過分離純化得到病原菌株(ZY-2),依據(jù)柯赫法則確定菌株的致病性后,顯微觀察形態(tài)特征,檢測(cè)生物學(xué)特性,并依據(jù)核糖體基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(rDNA-ITS)序列和翻譯延伸因子1α基因(tef)序列對(duì)該菌進(jìn)行分子鑒定,探討利用內(nèi)生菌防治芝麻枯萎病的生物防治技術(shù),主要研究結(jié)果如下:
　　1、根據(jù)

2、病原菌形態(tài)、致病性,結(jié)合核糖體基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(rDNA-ITS)和翻譯延伸因子la基因(tef)序列分析,將病原菌鑒定為尖孢鐮刀菌Fusarium oxysporum。該菌適宜生長(zhǎng)溫度為22～31℃,最適生長(zhǎng)溫度為28℃;在pH2.0~10.0范圍內(nèi)均可生長(zhǎng),以pH6.5~7.5生長(zhǎng)最好;供試的11種碳源和10種氮源都能被該菌利用,其中以蔗糖和葡萄糖作為唯一碳源生長(zhǎng)最為良好,以硝酸鈉和氯化銨作為唯一氮源生長(zhǎng)較好,但在以葡萄糖和L-脯氨

3、酸分別作為唯一碳源和氮源的培養(yǎng)基上不產(chǎn)生分生孢子。產(chǎn)胞外酶能力測(cè)定結(jié)果表明,病原菌株ZY-2可產(chǎn)生果膠酶和蛋白酶,不產(chǎn)生脂肪酶、纖維素酶、淀粉酶。
　　2、作者從健康的芝麻植株體內(nèi)分離得到166株內(nèi)生細(xì)菌,其中64株對(duì)芝麻枯萎病菌具有拮抗活性,分離率為38.6％。菌株C5-35、B5-47、B4-5及A4-2對(duì)病原菌生長(zhǎng)的抑制作用較強(qiáng)。結(jié)合內(nèi)生菌對(duì)幼苗在室內(nèi)平板和室外盆栽促生試驗(yàn)結(jié)果,篩選出3株內(nèi)生菌(B5-47、A4-2和A3-

4、28)作為供試生防菌。通過對(duì)菌株的形態(tài)學(xué)特征、生理生化測(cè)試及16S rDNA序列分析結(jié)果,將菌株B5-47、A4-2、A3-28鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。菌株A3-28的最適生長(zhǎng)溫度為30℃,最適生長(zhǎng)pH為7;菌株A4-2的最適生長(zhǎng)溫度為35℃,最適生長(zhǎng)pH為8;菌株B5-47的最適生長(zhǎng)溫度為30℃,最適生長(zhǎng)pH為8。對(duì)于9種供試碳源,3株內(nèi)生細(xì)菌均不能利用果糖、木糖醇、甘露醇。菌株A3-28均能利用8種