IBV分離株GX-YL5感染對(duì)雞氣管黏膜和哈德氏腺免疫功能影響的研究.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(Infectious bronchitis，IB)是由冠狀病毒雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的一種急性高度接觸傳染性呼吸道疾病，給養(yǎng)禽業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。IBV是典型的嗜黏膜病原，主要通過呼吸道黏膜途徑感染機(jī)體。黏膜免疫可誘導(dǎo)局部黏膜免疫和誘導(dǎo)全身免疫，在抗IBV感染免疫應(yīng)答中發(fā)揮非常重要的作用。禽類的氣管黏膜和哈德氏腺是黏膜免疫系統(tǒng)的重要組成部分，因此研究

2、IBV感染對(duì)氣管黏膜和哈德氏腺免疫功能的影響非常重要。
　　 本研究采用IBV廣西分離株GX-YL5人工感染免疫雞和非免疫雞，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)不同時(shí)相氣管黏膜和哈德氏腺中與天然免疫相關(guān)的部分模式識(shí)別受體（TLR2、TLR3、TLR6和TLR7）和細(xì)胞因子(IFN-α、IFN-β、Mx、IL-6、IL-10、IL-1β、MMP3、MIP-1β、CXCR4和CCR6)的mRNA轉(zhuǎn)錄水平與IBV病毒載量動(dòng)態(tài)，同時(shí)使

3、用ELISA檢測(cè)氣管黏膜和哈德氏腺分泌型免疫球蛋白A(sIgA)和血清IgG抗體，旨在從分子水平探究IBV對(duì)雞氣管黏膜和哈德氏腺免疫功能的影響，為闡明IBV的分子致病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:在感染早期（14DPI前），攻毒組和免疫攻毒組氣管黏膜和哈德氏腺TLR2、TLR3、TLR6和TLR7的mRNA表達(dá)水平在大部分時(shí)間點(diǎn)都出現(xiàn)了不同程度的上調(diào)，氣管黏膜TLR2、TLR3、TLR6和TLR7整體上比同組哈德氏腺上調(diào)表

4、達(dá)明顯。攻毒14天后，攻毒組和免疫攻毒組哈德氏腺與氣管黏膜所檢測(cè)TLRs表達(dá)水平已逐漸下調(diào)或恢復(fù)正常水平。揭示氣管黏膜和哈德氏腺TLR2、TLR3、TLR6和TLR7參與了IBV感染早期的免疫應(yīng)答，表明了IBV感染對(duì)宿主的天然免疫應(yīng)答具有明顯影響。
　　 在感染早期（14DPI前），攻毒組氣管黏膜IFN-β、IL-6、IL-10、IL-1β、CXCR4、CCR6和MMP3比同組哈德氏腺相同基因表達(dá)上調(diào)更明顯;免疫攻毒組氣管黏膜I

5、FN-α、IFN-β、Mx、IL-6、IL-10、IL-1β和CCR6比同組哈德氏腺相同基因上調(diào)表達(dá)明顯;攻毒組氣管黏膜Mx(8DPI前)、IFN-β(3DPI)和IL-10(5DPI)比免疫攻毒組氣管黏膜相同基因上調(diào)更顯著;攻毒組哈德氏腺M(fèi)x(1DPI)、IFN-β(8DPI)、IL-10(5DPI)和CCR6(1DPI)與免疫攻毒組哈德氏腺相同基因表達(dá)差異明顯。攻毒14天后，上述細(xì)胞因子在攻毒組和免疫攻毒組哈德氏腺與氣管黏膜表達(dá)水平

6、已逐漸下調(diào)或恢復(fù)正常水平，表明了IBV感染早期多種細(xì)胞因子參與了抗IBV感染免疫應(yīng)答，但對(duì)IBV感染的免疫應(yīng)答程度因細(xì)胞類型及宿主免疫狀態(tài)差異而不同。
　　 攻毒組和免疫攻毒組氣管黏膜病毒載量分別在攻毒后3天和攻毒后5天達(dá)到峰值，攻毒組和免疫攻毒組哈德氏腺病毒載量均在攻毒后3天達(dá)到峰值，攻毒組和免疫攻毒組氣管黏膜和哈德氏腺在攻毒后1天至8天都保持較高的病毒載量，隨后隨時(shí)間的推移病毒含量逐漸減少。整體上攻毒組氣管黏膜和哈德氏腺比免

7、疫攻毒組相同組織的病毒載量高，攻毒組和免疫攻毒組哈德氏腺病毒載量消長(zhǎng)情況與它們的氣管黏膜病毒載量變化趨勢(shì)基本呈正相關(guān)性。結(jié)果證實(shí)了IBV GX-YL5可在氣管黏膜和哈德氏腺中復(fù)制，感染雞氣管黏膜和哈德氏腺病毒載量與雞的臨床表現(xiàn)存在時(shí)間相關(guān)性。同時(shí)，感染雞氣管黏膜和哈德氏腺病毒載量和相應(yīng)組織的TLRs和細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平整體上也呈現(xiàn)一定的相關(guān)性。
　　 在所檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)中，只發(fā)現(xiàn)攻毒組氣管洗液sIgA在5DPI和8DPI、免疫

8、攻毒組氣管洗液sIgA在8DPI，與哈德氏腺sIgA在1DPI與5DPI出現(xiàn)顯著上調(diào)(P＜0.05)外，其它時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比差異均不顯著。免疫攻毒組血液中特異性IgG抗體產(chǎn)生非常迅速，在攻毒后3天抗體水平就開始明顯升高，直到攻毒后14天達(dá)到高峰，在攻毒后28天仍維持較高的抗體水平;攻毒組在攻毒后5天才出現(xiàn)抗體升高的趨勢(shì)，在攻毒后14天達(dá)到高峰，同樣至攻毒后28天仍維持較高的抗體水平。結(jié)果提示IBV GX-YL5刺激雞體氣管黏膜和哈德氏