不同倍性泥鰍(Misgurnus anguillicaudatus)鰭細胞系的建立及特性分析.pdf

1、分類號分類號密級UDC編號碩士學位論文不同倍性泥鰍（Misgurnusanguillicaudatus）鰭細胞系的建立及特性分析馬辰(1111018)指導教師姓名李霞教授專業(yè)名稱海洋生物學論文答辯日期2014年6月4日學位授予日期2014年月摘要I摘要采用組織塊培養(yǎng)法啟動二倍體、三倍體和四倍體泥鰍鰭組織細胞原代培養(yǎng)，胰蛋白酶消化法傳代，目前二倍體、三倍體和四倍體細胞已經分別傳至84代、75代和68代。三種細胞均為成纖維細胞樣細胞。鰭組織

2、無菌處理方法是：先用質量濃度為10%的碘伏浸泡15min；后用青霉素和鏈霉素的混合液（500IUmL青霉素，500μgmL鏈霉素）浸泡30min；原代培養(yǎng)和早期傳代培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為DMEMF12，添加體積分數為20%的胎牛血清、10ngmL人堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）、20ngmLI型胰島素樣生長因子（IGFI）以及10μgmL硫酸軟骨素。30代以后所用培養(yǎng)基為20%FBSDMEMF12。細胞培養(yǎng)在25℃、5%CO2培養(yǎng)箱中。

3、對培養(yǎng)的二倍體、三倍體和四倍體細胞進行染色體分析，特征染色體數目分別為50、75和100，同時進行了微衛(wèi)星實驗確定培養(yǎng)的細胞系為二倍體、三倍體和四倍體泥鰍鰭細胞系，分別命名為：DIMF、TRMF和TEMF。在以上培養(yǎng)條件下，二倍體、三倍體和四倍體的倍增時間分別為48.43h、36.01h和41.45h；測定的二倍體、三倍體和四倍體細胞及核的體積比分別為1:1.37:2.37和1:1.53:1.97；細胞經液氮冷凍保存60d后，解凍復蘇后