?；蛆Z去氧膽酸對抗地塞米松誘導小鼠腎上腺皮質細胞系Y1凋亡的研究.pdf

1、膽汁酸在傳統(tǒng)上被認為在脂質吸收和膽固醇代謝中發(fā)揮重要作用，近年來，研究發(fā)現(xiàn)膽汁酸的作用較為復雜，不僅對脂質代謝，而且可以通過作用于膽汁酸受體FXRα和TGR5在能量代謝、內分泌調節(jié)、抗炎和抗細胞凋亡等多方面發(fā)揮藥理或生理作用。?；蛆Z去氧膽酸(Taurochenodeoxycholic Acid，TCDCA)作為膽汁酸的一類重要的結合型成分，以往研究發(fā)現(xiàn)其具有對抗糖皮質激素不良反應的作用，設計本課題就是為了進一步揭示其對抗糖皮質激素不良反

2、應的機制。本課題以腎上腺皮質細胞系Y1作為研究對象，進行了腎上腺皮質細胞系的TGR5受體的干擾，就TCDCA對Y1細胞作用進行系列研究。
　　對腎上腺皮質細胞系Y1的研究如下:采用二苯胺法檢測地塞米松誘導Y1細胞凋亡的DNA片段化百分率，結果表明DEX能夠增加Y1細胞的DNA片段化百分率。二苯胺法和TUNEL法檢測TCDCA對抗DEX誘導Y1細胞凋亡，與模型組相比較每個劑量TCDCA均可以極顯著的降低DNA片段化百分率，TUNEL

3、染色結果顯示與模型組相比較給藥后凋亡細胞數(shù)量顯著降低，凋亡指數(shù)顯著減小。實時熒光定量檢測DEX對凋亡抑制基因影響結果顯示:不同劑量的DEX均能不同程度的上調CIAP-1、CIAP-2、XIAP基因表達量，表明DEX啟動了Y1細胞的凋亡程序，但凋亡抑制基因的上調并不是隨DEX劑量的增加而持續(xù)增加。給予不同劑量的TCDCA后，CIAP-1、CIAP-2、XIAP基因表達量與模型組相比較均有不同程度下調，但與空白對照相比較CIAP-1、CIA

4、P-2、XIAP基因表達量仍然上調。利用CCK-8試劑盒檢測細胞增殖的變化，DEX對Y1細胞的增殖有抑制作用，TCDCA可以極顯著的促進Y1細胞的增殖，但DEX和TCDCA聯(lián)合應用時，TCDCA不表現(xiàn)出促細胞增殖作用。
　　對干擾后的腎上腺皮質細胞系Y1的研究如下:使用RNA干擾技術對細胞系Y1TGR5受體進行基因干擾，熒光定量檢測TGR5受體干擾效率，獲得干擾效率為47％可穩(wěn)定傳代的細胞系進行以下系列試驗。二苯胺法檢測DEX對干

5、擾后細胞的DNA片段化百分率，與干擾前相比較DNA片段化百分率無顯著變化，二苯胺法檢測TCDCA對抗DEX誘導干擾后Y1細胞的DNA片段化百分率，與模型組相比較TCDCA劑量為1μg/mL時，可極顯著的降低DNA片段化百分率。實時熒光定量檢測DEX對干擾后細胞凋亡抑制基因表達量的變化，不同劑量DEX仍可以上調CIAP-1、CIAP-2、XIAP基因表達，給予不同劑量TCDCA后， CIAP-2、XIAP基因表達量與模型組相比較可顯著下調

6、，CIAP-1的表達量無顯著變化，與空白對照相比較CIAP-2、XIAP表達量顯著上調，CIAP-1的表達量無顯著變化。使用CCK-8試劑盒檢測干擾后細胞增殖的變化，多個劑量的DEX均可極顯著的抑制干擾后細胞的增殖，TCDCA對干擾后的細胞無促增殖作用。
　　從以上結果可以得出如下結論:TCDCA可以對抗DEX誘導的Y1細胞的凋亡，TCDCA可以使凋亡抑制基因CIAP-1、CIAP-2、XIAP的表達下調，TCDCA可以促進Y1細