綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞的培養(yǎng)純化及生長的研究.pdf

1、綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞來源于胎盤合體滋養(yǎng)層，位于母胎界面，大部分位于胎盤子葉中，其功能主要是轉(zhuǎn)移和運輸胎兒所需的營養(yǎng)物質(zhì)、進(jìn)行氣體交換、分泌多種激素，并保護(hù)胎兒免受母體免疫系統(tǒng)的損傷。體外培養(yǎng)得到較高純度的綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞可以為后續(xù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染、細(xì)胞生長研究和細(xì)胞生物學(xué)特性測定等試驗提供細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)，可為研究病毒與宿主的互作提供細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。
　　本試驗選取妊娠中期的綿羊胎盤子葉作為取樣部位，采用胰蛋白酶和膠原酶兩步消化法分離培

2、養(yǎng)細(xì)胞，通過倒置相差顯微鏡觀察滋養(yǎng)層細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點，應(yīng)用常規(guī)HE染色和免疫組織化學(xué)染色法，透射電子顯微鏡技術(shù)對綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行鑒定。倒置相差顯微鏡下，滋養(yǎng)層細(xì)胞為雙核及多核細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)為上皮樣細(xì)胞，呈片狀鋪展生長。常規(guī)HE染色結(jié)果表明胎盤子葉部位存在大量多核滋養(yǎng)層細(xì)胞，培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細(xì)胞出現(xiàn)雙核及多核現(xiàn)象;對胎盤子葉與培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細(xì)胞用細(xì)胞角蛋白7(CK7)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，胎盤子葉多核滋養(yǎng)層細(xì)胞與培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細(xì)胞胞質(zhì)

3、區(qū)域結(jié)果均為棕色陽性信號;利用透射電鏡技術(shù)，在電鏡下可見滋養(yǎng)層細(xì)胞表面微絨毛發(fā)達(dá)，胞質(zhì)內(nèi)有較多膜包小泡及豐富的微絲和脂滴。
　　本試驗應(yīng)用Percoll通過密度梯度離心法對培養(yǎng)的原代細(xì)胞進(jìn)行純化，重復(fù)試驗，得出選用40％和60％兩個梯度純化滋養(yǎng)層細(xì)胞，純化后雙核及多核滋養(yǎng)層細(xì)胞比例高，純化率達(dá)80％以上。在此基礎(chǔ)上，從細(xì)胞的穩(wěn)定性和適應(yīng)性方面進(jìn)行了滋養(yǎng)層細(xì)胞的生長研究，根據(jù)連續(xù)7天的觀察和CCK-8跟蹤標(biāo)記的數(shù)據(jù)作出對應(yīng)的生長曲線