外源微生物誘導家蠶幼蟲血液黑化以及黑色素代謝中間產(chǎn)物分析.pdf

1、家蠶作為一種重要的經(jīng)濟昆蟲，在我國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟中占有重要地位，但是家蠶容易遭受多種病原物的侵襲，往往給國家和農(nóng)民造成巨大的經(jīng)濟損失。家蠶是節(jié)肢動物中的重要模式昆蟲，節(jié)肢動物沒有像哺乳動物那樣完善的獲得性免疫防御系統(tǒng)，當有外源物侵染時，它們只能依靠先天性免疫防御系統(tǒng)進行廣譜性應(yīng)答。因此，研究家蠶先天免疫防御機制對提高家蠶抗病能力和推動蠶業(yè)發(fā)展具有重要的理論意義，此外，研究家蠶的免疫防御機制對于推進鱗翅目其他昆蟲相關(guān)研究也具有重要意義，也可為鱗

2、翅目害蟲的防治提供借鑒。
　　黑色素沉積在入侵病原體的表面是節(jié)肢動物進行免疫應(yīng)答的主要表現(xiàn)之一，黑化反應(yīng)是否參與節(jié)肢動物的免疫防御早就引起了人們的關(guān)注，學者們也進行了很多的關(guān)于昆蟲黑化免疫機制的研究，主要集中在果蠅和蚊子。目前關(guān)于家蠶先天性免疫的研究報道主要集中在抗菌肽、信號通路、以及模式識別蛋白受體等方面，而關(guān)于家蠶黑化免疫的報道還相對較少。本文通過對家蠶幼蟲血液體外顏色變化觀察、外源微生物誘導家蠶幼蟲血液黑化分析、以及微生物侵

3、染對幼蟲血液中黑色素代謝中間產(chǎn)物含量的影響等實驗來探索家蠶黑化反應(yīng)在免疫防御過程中扮演的角色。主要研究結(jié)果如下:
　　1.家蠶幼蟲血液體外變化觀察本研究使用的毛細針可以在很大程度上阻斷外界空氣與針管內(nèi)物質(zhì)的接觸。家蠶幼蟲血液在毛細針中可以保持透明狀較長時間。我們在三種不同的溫度(37℃、室溫、4℃)條件下觀察毛細針中壯蠶時期的血液顏色變化。結(jié)果顯示:4齡第一天血液顏色變黑變深速度最慢，5齡第六天變黑變深速度最快，有隨著幼蟲食桑生長

4、血液顏色變黑變深速度逐漸加快的特點;在不同的溫度條件下，37℃高溫下血液變黑最快，變黑變深現(xiàn)象也最明顯，室溫次之，4℃低溫條件下最慢，血液變黑速度和明顯程度有隨著溫度的降低逐漸減弱的特點。
　　2.外源微生物誘導家蠶幼蟲血液黑化分析用大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白僵菌三種微生物，以微生物:血液體積比為1∶2、1∶1和2∶1三種比值在毛細針中觀察4齡第三天和5齡第六天幼蟲血液顏色變化。結(jié)果顯示:當有外源微生物時，血液顏色變黑變深的速度明

5、顯加快;5齡幼蟲血液變黑速度比4齡幼蟲血液變黑速度快;當外源微生物為大腸桿菌時，血液變黑變深速度最快，現(xiàn)象最明顯，枯草芽孢桿菌次之，白僵菌最慢;微生物:血液體積比為1∶2時，血液變黑變深速度相對較快。
　　3.家蠶幼蟲血液體外對微生物生長的影響用前述微生物與4齡第三天、5齡第三天和5齡第六天的血液反應(yīng)6h和24h后統(tǒng)計微生物的生長情況。結(jié)果顯示:與5齡第六天血液反應(yīng)的微生物生長最差，5齡第三天次之，4齡第三天生長相對較好;與幼蟲血

6、液反應(yīng)的大腸桿菌生長比其它微生物生長差;微生物:血液體積比值1∶2的微生物生長比2∶1的生長差;反應(yīng)6h的微生物比反應(yīng)24h的生長差。
　　4.免疫誘導對家蠶幼蟲血液中多巴、多巴胺含量影響用大腸桿菌溶液注射5齡第三天幼蟲，HPLC檢測注射后6h和24h幼蟲血液中多巴和多巴胺含量。結(jié)果顯示:注射6h后多巴含量有下降趨勢，注射24h后多巴含量明顯下降;注射大腸桿菌溶液后未檢測到血液中多巴胺含量明顯變化。
　　綜上結(jié)果認為:外源微