草莓試管苗玻璃化特性及DNA與MSAP分析.pdf

1、碩士學位論文藍莓試管苗玻璃化特性及D N A 的M S A P 分析T h e c h a r a c t e r i s t i c sa n dM S A P a n a l y s i so fh y p e r h y d r i c b l u e b e r r y ／nv i t r op l a n t l e t學 2 1 1 1 8 0 6 8完成日期： 至Q 至壘生墨旦大連理工大學D a l i a n U n i

2、 v e r s i t y o f T e c h n o l o g y大連理工大學碩士學位論文摘 要玻璃化是植物組織培養(yǎng)過程中普遍發(fā)生的一種生理失調(diào)和形態(tài)畸變現(xiàn)象，玻璃化苗無法正常增殖及生根，嚴重影響試管苗的產(chǎn)量和質(zhì)量。從生理生化及分子水平研究玻璃化苗的變化，對玻璃化的發(fā)生機制及其防治、恢復都具有重要意義。藍莓組織培養(yǎng)過程中極易發(fā)生玻璃化現(xiàn)象，給其工廠化生產(chǎn)造成了嚴重的損失。本文研究了藍莓玻璃化苗形態(tài)結(jié)構、生理生化及D N A 甲

3、基化水平的變化，并探索了瓊脂、蔗糖、A g N 0 3 、C O C l 2及脫水處理對藍莓玻璃化苗恢復的影響，主要結(jié)果如下：1 ．與正常試管苗相比，藍莓玻璃化苗莖、葉的顯微及亞顯微結(jié)構發(fā)生了明顯改變：葉片厚度增加，表皮細胞呈現(xiàn)松散、不連續(xù)狀態(tài)，氣孔結(jié)構異常，柵欄組織缺失，海綿組織細胞間隙變大，部分細胞甚至發(fā)生解體；莖的維管組織變形，發(fā)育狀況較差。透射電鏡觀察結(jié)果發(fā)現(xiàn)，玻璃化苗的葉肉細胞體積增大，葉綠體數(shù)目減少，類囊體解體，淀粉體缺失。

4、2 ．藍莓玻璃化苗的生理生化特性發(fā)生了較大的改變：與正常苗相比，玻璃化苗組織含水量顯著增加；葉綠素、可溶性糖及可溶性蛋白含量顯著降低：0 2 - 產(chǎn)生速率、H 2 0 2積累量、M D A 含量及相對電導率顯著升高；活性氧清除酶系中P O D 活性顯著升高、S O D和C A T 活性顯著降低；P A L 活性下降。說明藍莓玻璃化苗的水分代謝、物質(zhì)代謝及活性氧代謝紊亂，活性氧清除能力降低。3 ．對玻璃化苗進行脫水處理或增加培養(yǎng)基中瓊脂濃

5、度至7 ．4 9 ／L 、添加5m g ／L 的A g N 0 3 均能使部分玻璃化苗得以恢復，恢復苗的部分生理指標可以達到甚至超過正常苗的標準。其中脫水處理2 天的恢復率可達8 9 ．2 3 ％，恢復效果最好。4 ．利用甲基化敏感擴增多態(tài)性( m e t h y l a t i o n - s e n s i t i v e a m p l i f i c a t i o n p o l y m o r p h i s m ，M S

6、A P ) 技術對藍莓玻璃化苗和正常苗C C G G 位點胞嘧啶甲基化水平進行比較，結(jié)果表明，玻璃化苗基因組D N A 甲基化比率為6 6 ．2 2 ％，明顯高于正常苗的5 1 ．8 2 ％，其中甲基化增加類型所占比例( 4 0 ．1 2 ％) 明顯高于去甲基化類型所占比例( 3 0 ．5 4 ％) 。說明D N A 甲基化水平和模式的改變可能與藍莓試管苗的玻璃化密切相關。本研究為進一步闡明藍莓玻璃化發(fā)生機制奠定了基礎，并對藍莓玻璃化苗