滿天星試管玻璃化苗與正常苗的比較研究.pdf

1、試管植物的玻璃化，是指試管苗外觀形態(tài)呈半透明狀的生長異常現(xiàn)象。一旦形成玻璃化苗，植株的增殖系數(shù)即明顯下降，既不能再用于后續(xù)的生根或繼代增殖培養(yǎng)，移栽也難以成活。因此，玻璃化是試管苗生產(chǎn)中亟待解決的一個問題。本試驗以滿天星試管正常苗和玻璃化苗為材料，通過對生理生化特性、酯酶同工酶、過氧化物同工酶和RAPD指紋圖譜等方面進行了研究，探討了滿天星試管正常苗和玻璃化苗的差異，為進一步研究滿天星試管苗玻璃化發(fā)生機理提供基礎數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。主要研究

2、結(jié)果如下： 玻璃化苗組織含水量較高，為95.8％，而正常苗為91.7％，顯著高于正常苗。玻璃化苗的各種葉綠素含量及可溶性糖和還原糖含量分別為正常苗的14.0％，63.8％和86.9％，顯著低于正常苗；而玻璃化苗的過氧化物酶(POD)活性增加，是正常苗的3倍多。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳法對酯酶同工酶和過氧化物同工酶進行了分析，結(jié)果玻璃化苗的酯酶同工酶電泳譜帶出現(xiàn)缺失的異?，F(xiàn)象，同時其譜帶顏色較淺；玻璃化苗的過氧化物酶活性明顯高于正常

3、苗，與過氧化物酶活性測定的結(jié)果一致，且玻璃化苗過氧化物酶的譜帶數(shù)也明顯多于正常苗，這種酶譜反映了玻璃化苗和正常苗的堿性過氧化物同工酶譜帶和酶活性上的差異。以CTAB法提取正常苗和玻璃化苗的基因組DNA，經(jīng)過檢驗，適合RAPD分析的需要。建立了滿天星適宜的RAPD反應體系：總反應體積為25 μl，其中包括14.17μlddH<,2>O，150 μmol/L dNTlP，1.5 mmol/L MgCl<,2>，2.5μl Buffer，0.

4、3 μmol/L引物，10 ng DNA模板，1 U Taq DNA聚合酶。反應程序為：94℃預變性5 min，94℃變性1 min，36℃退火1 min，72℃延伸1.5 min：45個循環(huán)；最后72℃延伸7 min。 RAPD結(jié)合BSA(分離群體分組分析法)，用100個隨機引物對滿天星試管正常苗和玻璃化苗的兩個基因池進行RAPD指紋圖譜分析，發(fā)現(xiàn)有7個隨機引物擴增出了多態(tài)性的差異譜帶。再用上述7條引物分別對滿天星試管苗及其玻