SRBSDV在水稻原生質(zhì)體內(nèi)的復(fù)制與表達(dá).pdf

1、南方水稻黑條矮縮病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus, SRBSDV）由介體白背飛虱以持久增殖型傳播，該病毒已成為威脅我國水稻產(chǎn)量的重要的病毒之一。本文通過酶解法獲得有較高活性的水稻原生質(zhì)體，建立病毒侵染原生質(zhì)體系，將抗體與熒光素交聯(lián)，利用抗體與抗原特異性結(jié)合原理，通過激光共聚焦顯微鏡觀察病毒在原生質(zhì)體內(nèi)的復(fù)制及表達(dá)。同時通過實時熒光定量PCR以及Western blot檢測病毒相關(guān)基因

2、轉(zhuǎn)錄及其蛋白的表達(dá)動態(tài)。
　　首先通過Gateway系統(tǒng)進(jìn)行原核表達(dá)，免疫兔子獲得SRBSDV結(jié)構(gòu)蛋白P10和非結(jié)構(gòu)蛋白P9-1的抗血清，間接ELISA測定其效價分別為6400倍和3200倍，Western blot檢測結(jié)果表明兩個抗體均可特異性檢測感病毒株。利用IC-RT-PCR和Dot-blot ELISA方法來檢驗兩個抗體的靈敏度，兩者的檢測結(jié)果表現(xiàn)一致，說明SRBSDV的P9-1蛋白的抗體及P10蛋白的抗體具有較強(qiáng)的靈敏度

3、。
　　利用PEG介導(dǎo)SRBSDV病毒侵染原生質(zhì)體，培養(yǎng)48h后利用熒光素交聯(lián)的P9-1、P10抗體進(jìn)行孵育，共聚焦顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，P10蛋白的表達(dá)量少于P9-1蛋白表達(dá)量。通過熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，SRBSDV的S5-1、S5-2、S6、S7-2、S9-1、S9-2基因在原生質(zhì)體內(nèi)36h左右表達(dá)達(dá)到高峰，S7-1以及S10基因在水稻原生質(zhì)體內(nèi)48h左右表達(dá)達(dá)到峰值。而通過Western blot檢測結(jié)果顯示，SRBSDV