利用農(nóng)桿菌通過花器浸蘸法轉(zhuǎn)化小麥的研究.pdf

1、根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)已被廣泛用于雙子葉植物遺傳轉(zhuǎn)化,但是卻比較難以轉(zhuǎn)化單子葉植物特別是具有重要經(jīng)濟(jì)值的小麥、玉米和水稻等.農(nóng)桿菌介導(dǎo)擬南芥轉(zhuǎn)化的花器浸蘸法(floral dip)是當(dāng)前不需要組織培養(yǎng)或植株再生的最簡單的轉(zhuǎn)化方法.我們將該方法應(yīng)用于小麥的轉(zhuǎn)化,通過GUS報(bào)告基因系統(tǒng)詳細(xì)的探討了影響GUS瞬時(shí)表達(dá)頻率的因素,并有分子證據(jù)表明外源基因已經(jīng)整合進(jìn)小麥的基因組中,初步建立了通過花器浸蘸法

2、利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化小麥的體系.在該研究中,農(nóng)桿菌菌株LBA4404(pTOK233)有徠對(duì)處于花期的小麥穗部進(jìn)行浸蘸處理,其含有一超雙元載體pTOK233,在其T-DNA區(qū)攜帶有g(shù)us報(bào)告基因和潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(hpt),我們?cè)诓煌幚項(xiàng)l件下對(duì)小麥花器的GUS瞬時(shí)表達(dá)頻率進(jìn)行了研究,并根據(jù)GUS的瞬時(shí)表達(dá)頻率確立了適宜的接種條件.結(jié)果表明,適宜的接種時(shí)期應(yīng)在小麥開花前2天至剛見花;接種菌液的OD600值應(yīng)0.75至0.9之間;接種菌液的