小麥Rubisco和Rubisco活化酶抗體的制備及應(yīng)用.pdf

1、在傳統(tǒng)分離方法的基礎(chǔ)上采用快流速的陰離子交換載體DEAE-TOYOPEARL-650M純化小麥Rubisco活化酶,并通過<'14>C同位素標(biāo)記法測定純化所得的Rubisco活化酶的活性.純化所得的Rubisco活化酶經(jīng)SDS-PAGE后在凝膠上出現(xiàn)分子量為41 000和45 000的兩個蛋白質(zhì)條帶,通過活性測定,證實其對Rubisco有活化作用,且ATP再生系統(tǒng)能顯著提高Rubisco活化酶的活性.以純化所得的Rubisco活化酶和該

2、實驗室保存的Rubisco為抗原,通過皮下多點分次注射法免疫新西蘭大白兔以制備Rubisco及其活化酶的多克隆抗體.通過棋盤滴定法來測定兔血清中多克隆抗體的滴度并選擇其最佳的抗原抗其工作濃度.新西蘭大白兔三次經(jīng)免疫后測得其血清中Rubisco及其活化酶抗體的滴度分別為1:25600和1:51200;最佳工作濃度分別是抗原(Rubisco)濃度0.95μg·ml<'-1>,其相應(yīng)的多克隆抗血清的滴度為1:800;抗原(Rubisco活化酶

3、)的濃度為0.88μg·ml<'-1>,其相應(yīng)的多克隆抗血清的滴度為1:1600.對兩個不同品種的盆栽小麥進行不同光照和施氮水平處理,并提取其粗酶液,按照上述最佳工作濃度分別稀釋該粗酶液以及相應(yīng)的多克隆抗體,通過ELISA測定小麥葉片中的Rubisco及其活化酶含量.用同樣的方法測定抽穗期小麥不同葉位的葉片以及玉米、蠶豆和油菜中Rubisco及其活化酶的含量.得到如下結(jié)果:①光對Rubisco蛋白合成具有促進作用;長時間弱光照適應(yīng)之后再

4、進行強光照片理,其葉片中Rubisco含量的增加值和增加幅度均大于連續(xù)27h暗適應(yīng)后再經(jīng)強光處理的增加值和增加幅度;活化酶含量亦隨光強和光照時間的增加而逐漸上升,只是趨勢沒有Rubisco那么明顯;②高氮處理的小麥兩酶含量高于低氮處理;③玉米因為是C<,4>作物,所以其體內(nèi)兩酶的含量不如C<,3>作物蠶豆和油菜高;④對于抽穗期的揚麥158,其葉片體內(nèi)Rubisco及活化酶含量會隨葉位的降低而減少;⑤葉綠素含量的變化情況與不同處理植株體內(nèi)