29475.鯉魚類胰島素生長因子結(jié)合蛋白(igfbp)1、2和3基因的克隆及其表達(dá)調(diào)控機(jī)制研究

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文鯉魚類胰島素生長因子結(jié)合蛋白（IGFBP）1、2和3基因的克隆及其表達(dá)調(diào)控機(jī)制研究姓名：陳文波申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師：林浩然李文笙20090606陳文波中山大學(xué)博士學(xué)位論文2009年6月2除了IGFBP1在垂體表達(dá)較弱外，IGFBP1、2和3mRNA在腦各分區(qū)中表達(dá)量都較高。IGFBP1mRNA在肝臟、胸腺、血液、視網(wǎng)膜和肌肉中表達(dá)量都較高，腎臟、心臟、皮膚、鰓絲、脾臟、中腸和精巢表達(dá)量次之，在后

2、腸、前腸、卵巢和頭腎等其它組織中表達(dá)量很低：IGFBP2mRNA盡管在肝臟中表達(dá)量最高，但在肝臟、垂體、卵巢和精巢中的表達(dá)量也較高，在白肌、胸腺和頭腎中表達(dá)量次之，而在視網(wǎng)膜、心臟和其它組織中只能檢測到很微弱的表達(dá)條帶。IGFBP3mRNA在視網(wǎng)膜、紅肌、肝臟、心臟、后腸、脾臟和精巢中表達(dá)量相對較高，白肌、腎臟、胸腺和卵巢中表達(dá)量相對較低，頭腎、血液、皮膚、鰓絲、中腸和前腸中表達(dá)量更低。在受精卵和胚胎分裂期都沒有檢測到IGFBP1、2和

3、3mRNA表達(dá)，直到囊胚期才能檢測到其mRNA，并隨著胚胎發(fā)育階段的進(jìn)行它們的表達(dá)量升高，且在某些階段表達(dá)量急劇增加。結(jié)果表明，IGFBP1、2和一3可能參與了魚類的早期發(fā)育。IGFBP1和2mRNA的表達(dá)量在卵巢發(fā)育期較低，在成熟期急劇增加，隨之在退化期恢復(fù)到極低的水平。IGFBP3mRNA在卵巢發(fā)育期的表達(dá)顯著高于成熟期和退化期。在精巢中，IGFBP1mRNA在發(fā)育期和成熟期的表達(dá)要顯著高于退化期；IGFBP2的表達(dá)以成熟期為最高；

4、IGFBP3mRNA在三個時期的表達(dá)量沒有顯著性變化。這些結(jié)果表明，IGFBP1、2和3基因可能參與了鯉魚性腺的發(fā)育。3低濃度的GH(1nM)就可以使肝細(xì)胞中IGFBP1mRNA表達(dá)量顯著下降，并且隨著GH濃度的增加，抑制程度沒有顯著性變化。與IGFBP1不同，GH抑制IGFBP2mRNA的表達(dá)呈現(xiàn)劑量依存效應(yīng)。10nMGH能使IGFBP1mRNA的表達(dá)量先下降，12小時達(dá)到最低，隨后表達(dá)量逐漸增加直至恢復(fù)原有水平。不同的是，IGFBP

5、2mRNA的表達(dá)水平旱現(xiàn)時間梯度效席。進(jìn)一步對下游信號通路研究表明，MAPK和P13k信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可能都參與了GH對二者在鯉魚肝細(xì)胞中的表達(dá)調(diào)控。O1“Minsulin能顯著性增加IGFBP—l和一2mRNA的表達(dá)量，但在IpM和5vM的高濃度下，表達(dá)量與對照組相比差異不顯著。不同濃度的8CPTcAMP、Forskolin和IBMX都能刺激鯉魚肝細(xì)胞中IGFBP1mRNA表達(dá)，且早劑量依存方式。腺苷酸環(huán)化酶抑制劑MDLl2330A和PK

6、A的選擇性抑制荊H89都能夠阻斷insulin對IGFBP1mRNA的刺激表達(dá)。這表明，至少PKA信號途徑參與了insulin刺激肝細(xì)胞中IGFBP1的基岡表達(dá)調(diào)控之中。4克隆得劍了鯉魚IGFBP—l、一2和一3基岡的啟動子序列，長度分別是1412bp、1286bp和1187bp。在鯉魚IGFBP一1和IGFBP一3啟動子中，距離潛在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)26bp和22bp處各存在一個TATA框，TATA框上游只在IGFBP1啟動子中發(fā)現(xiàn)CAAT