2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、IGFBP—6是IGF—II的高親和力結(jié)合蛋白,對IGF—II活性具有重要的調(diào)節(jié)作用。IGFBP—6所具有的抑制IGF—II促腫瘤生長活性的作用已經(jīng)在很多腫瘤細(xì)胞系中得到了證實(shí)。隨著研究的深入,IGFBP家族越來越多的生物學(xué)活性受到了人們的重視。IGFBP—6在體內(nèi)廣泛的分布及其與IGF—II的特殊關(guān)系表明對其活性的研究具有重要的意義。本論文的研究工作從以下方面對IGFBP—6的功能進(jìn)行了研究。
   首先在原核表達(dá)體系中表達(dá)了

2、重組人IGFBP—6及其C端,分離純化得到了足夠純度的蛋白產(chǎn)品,檢測了重組人IGFBP—6抑制IGF—II促腫瘤細(xì)胞生長的活性,并對IGFBP—6及其C端獨(dú)立于IGF的生物學(xué)活性做了初步的研究。
   1.成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET—30b—IGFBP—6和pET—30b—IGFBP—6—C,轉(zhuǎn)化.E.coli感受態(tài)細(xì)胞,篩選到了高表達(dá)量的菌株,優(yōu)化了表達(dá)條件。
   2.成功分離純化了可溶性表達(dá)的IGFBP—6及其C

3、端,得到純度大于90%的目的蛋白。
   3.檢測了IGFBP—6抑制IGF—II促腫瘤細(xì)胞A549增殖的活性。
   4.檢測了IGFBP—6及其C端單獨(dú)也可以抑制PC—3M細(xì)胞的生長,證實(shí)IGFBP—6具有不依賴IGF—II的生物活性,且進(jìn)一步明確該作用位點(diǎn)就在其C端。
   另外,用本室保存的pEGF—C1—IGFBP—6的質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PC—3M細(xì)胞,根據(jù)綠色熒光強(qiáng)度在細(xì)胞核和細(xì)胞漿中的比例,確定了IGFB

4、P—6在細(xì)胞核中是有分布的:且構(gòu)建了pEGFP—C1—BP6—nls和pEGFP—C1—BP6—mut兩個(gè)真核轉(zhuǎn)染質(zhì)粒,明確了IGFBP—6的核定位相關(guān)序列;并通過Annexin V—EGFP和PI雙染凋亡檢測試劑盒檢測了過表達(dá)IGFBP—6的PC—3M的凋亡,為進(jìn)一步研究IGFBP—6的非IGF依賴的生物學(xué)活性提供了理論依據(jù)。
   通過上述工作,首先在原核表達(dá)體系中表達(dá)并分離純化到可用于后續(xù)試驗(yàn)的IGFBP—6及其C端,檢測

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