核盤菌重寄生菌盾殼霉的固體發(fā)酵及分生孢子菌劑制備的研究.pdf

1、由核盤菌[Sclerotiniasclerotiorum(Lib.)deBary]引起的菌核病是油菜上的一種重要病害，在我國長江流域?yàn)楹?yán)重。近年來，菌核病的生物防治研究引起了國內(nèi)外許多研究者的重視。盾殼霉(Coniothyriumminitans)是核盤菌的一種重寄生菌，具有防治油菜菌核病的潛能。本文研究了利用油菜秸稈固體發(fā)酵盾殼霉，生產(chǎn)分生孢子的條件，研究了盾殼霉分生孢子可濕性粉劑的制備和分析方法，研究了盾殼霉制劑在不同溫度下的存活

2、性，最后研究了利用盾殼霉可濕性粉劑控制核盤菌菌核萌發(fā)及防治油菜菌核病的效果。 以油菜秸稈為基質(zhì)，以分生孢子產(chǎn)量、分生孢子萌發(fā)特性、抗紫外線和抗高溫(40℃)的能力為指標(biāo)，篩選出適于固體發(fā)酵的盾殼霉菌株Chy-1。秸稈基質(zhì)的含水量對(duì)盾殼霉的生長和分生孢子產(chǎn)生存在著顯著的影響(P＜0.05)。適宜的含水量為油菜秸稈：水=1：3～1：5；發(fā)酵周期以12天左右為宜；在每250ml三角瓶中10g油菜秸稈中接種5×106～2.6×108個(gè)孢

3、子范圍內(nèi)，接種量的多少對(duì)盾殼霉孢子產(chǎn)量沒有顯著的影響(P＞0.05)。發(fā)酵秸稈中營養(yǎng)較全面，基質(zhì)中分別添加不同碳源(可溶性淀粉、蔗糖、葡萄糖、麥芽糖)和有機(jī)氮(酵母粉、小牛浸膏、蛋白胨)的處理得到的盾殼霉分生孢子產(chǎn)量與對(duì)照處理的孢子產(chǎn)量差異不顯著(P＞0.05)。添加不同碳源、氮源得到的孢子的萌發(fā)率、抗紫外線和抗高溫(40℃)的能力不同，較好的碳源為可溶性淀粉，氮源為酵母粉。按照試驗(yàn)所篩選的培養(yǎng)條件，發(fā)酵盾殼霉菌株Chy-1時(shí)，在10g

4、油菜秸稈中添加50mL水，添加可溶性淀粉和酵母粉，接種量為5×106個(gè)孢子/瓶，培養(yǎng)12d，孢子平均產(chǎn)量為2×109孢子/g干秸稈。 通過篩選得到了盾殼霉可濕性粉劑的配方。其構(gòu)成為：分生孢子含量(大于108/g)，十二烷基苯磺酸鈉(1％～1.5％)，木質(zhì)素磺酸鈣或鈉(5％～10％)，黃原膠(1％)，硫酸鋅(0.1％)，抗壞血酸(10％)，硅藻土(補(bǔ)100％)。 對(duì)盾殼霉可濕性粉劑的質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行了測定。其含水量、潤濕時(shí)間、

5、pH值、細(xì)度懸浮率等指標(biāo)達(dá)到了有關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)。此外，文中還提出了適于檢測盾殼霉分生孢子含量和可濕性粉劑懸浮率的測定方法。 對(duì)盾殼霉可濕性粉劑中的分生孢子存活的測定結(jié)果表明，溫度是重要的存活影響因子。在4℃下粉劑中的孢子可存活120天，之后存活下降，但下降趨勢平緩，210d后從8.6×108個(gè)/g下降到5.1×107個(gè)孢子/g。在12℃、20℃、30℃下，40d后孢子的存活下降，下降幅度達(dá)2～3個(gè)數(shù)量級(jí)/40d，溫度越高孢子存活下降

6、的幅度越大，210d后，20℃、30℃處理的粉劑中檢測不到存活的分生孢子。 在油菜播種前，采用分生孢子菌核浸泡和土表噴霧的方法檢測盾殼霉對(duì)核盤菌菌核萌發(fā)的抑制作用。采用分生孢子菌核浸泡能夠控制油菜菌核病子囊盤的萌發(fā)和增加寄生菌核的頻率。2003年10月的試驗(yàn)，4×104個(gè)孢子/mL、4×105個(gè)孢子/mL和4×106個(gè)孢子/mL的盾殼霉浸泡處理的子囊盤萌發(fā)數(shù)分別為37、30和10個(gè)/盆，未腐爛的菌核數(shù)分別為18、11和8個(gè)/盆，

7、與水浸泡的處理(62個(gè)子囊盤/盆，27個(gè)未腐爛菌核/盆)相比差異顯著(P＜0.05)。2004年10月的試驗(yàn)，4×104個(gè)孢子/mL、4×105個(gè)孢子/mL和4×106個(gè)孢子/mL的盾殼霉浸泡處理的子囊盤數(shù)都為0/盆，未腐爛的菌核數(shù)為21、24和18個(gè)/盆，與水浸泡處理(9個(gè)子囊盤/盆，31個(gè)未腐爛菌核/盆)相比差異顯著(P＜0.05)。 土壤噴霧盾殼霉分生孢子也能夠控制油菜菌核病子囊盤的萌發(fā)和增加寄生菌核的頻率。2003年10

8、月的試驗(yàn)，4×106個(gè)孢子/mL、8×107個(gè)孢子/mL和2×108個(gè)孢子/mL盾殼霉孢子液噴霧處理的子囊盤萌發(fā)數(shù)分別為8、6和1個(gè)/盆，未腐爛菌核數(shù)分別為18、16和5個(gè)/盆，與水噴霧的處理(67個(gè)子囊盤/盆，35個(gè)未腐爛菌核/甕)相比差異顯著(P＜0.05)。2004年10月的試驗(yàn)，4×106個(gè)孢子/mL、8×107個(gè)孢子/mL和2×108個(gè)孢子/mL盾殼霉處理的子囊盤萌發(fā)數(shù)分別為94、70、37個(gè)/盆，未腐爛的菌核數(shù)分別為31、3

9、4、28個(gè)/盆，與水噴霧的處理(219個(gè)子囊盤/盆，50個(gè)未腐爛菌核/盆)相比差異顯著(P＜0.05)。 連續(xù)兩年(2004年和2005年)的田間試驗(yàn)結(jié)果表明，盾殼霉可濕性粉劑對(duì)油菜菌核病具有明顯的防治效果。在2004年試驗(yàn)中用盾殼霉可濕性粉劑處理(3.0×107個(gè)孢子/m2、8.0×108個(gè)孢子/m2和2.4×109個(gè)孢子/m2)的菌核病發(fā)病株率分別為14.6％、10.8％和8.5％，病情指數(shù)分別為為5.9、3.7和4.3，明

10、顯低于(P＜0.05)對(duì)照處理(發(fā)病率為39.5％，病情指數(shù)為12.9)。其中，盾殼霉高劑量處理(2.4×109個(gè)孢子/m2)的發(fā)病率明顯低于(P＜0.05)低劑量的處理(3.0×107個(gè)孢子/m2)。在2005年試驗(yàn)中，盾殼霉處理(3.0×107個(gè)孢子/m2、8.0×108個(gè)孢子/m2和2.4×109個(gè)孢子/m2)的菌核病發(fā)病率分別為27.9％、23.9％和21.2％，病情指數(shù)為8.3、5.6和4.7，明顯低于(P＜0.05)未用盾殼