三種鱘魚血清免疫球蛋白的比較研究.pdf

1、該文對(duì)健康非免疫狀態(tài)下3~4齡中華鱘(A.sinensis Gray,Chinese sturgeon)、2~3齡史氏鱘(A.schrenckii Brandt,Amur sturgeon)和3齡達(dá)氏鰉(H.dauricus Georgi,Huso sturgeon)血清蛋白及血清中的免疫球蛋白進(jìn)行了研究.采用聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法分析了這3種鱘魚的血清蛋白.依據(jù)哺乳類的血清蛋白分類方法將3種鱘魚的血清蛋白分為白蛋白和球蛋白(包括α、

2、β、γ-球蛋白);3種鱘魚血清蛋白在PAGE電泳膠板上可明顯的區(qū)分為7個(gè)主要帶區(qū),中華鱘、史氏鱘和達(dá)氏鰉的血清蛋白譜帶分別為7條、11條和8條,血清蛋白的總濃度分別為18.7 mg·ml<'-1>、21.25mg·ml<'-1>和24.6mg·ml<'-1>;3種鱘魚血清蛋白的相似系數(shù)表明在生物進(jìn)化中華鱘與史氏鱘親緣關(guān)系比達(dá)氏鰉與史氏鱘親緣關(guān)系近.采用飽和硫酸氨分步沉淀、sephadex-G200凝膠柱層析的方法純化制備了三種鱘魚的血清

3、免疫球蛋白并對(duì)其部分特性進(jìn)行了分析.實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.免疫印跡法證實(shí)所提純的蛋白為三種鱘魚血清免疫球蛋白IgM,其重鏈也具有抗體活性,而輕鏈的免疫印跡檢測(cè)結(jié)果為陰性.聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)得的中華鱘、史氏鱘和達(dá)氏鰉血清Ig的相對(duì)分子量分別為892kDa、867kDa和924kDa.采用降解SDS-PAGE測(cè)得三種鱘魚血清Ig重鏈亞基相對(duì)分子量都約為88kDa,中華鱘和史氏鱘的Ig輕鏈亞基相對(duì)分子量為29kDa;達(dá)氏鰉的Ig輕鏈亞基為兩種,

4、相對(duì)分子量分別為29kDa和26kDa.2.在37℃,0.05mol·L<'-1>Cys和0.002mol·L<'-1>EDTA-Na<,2>的實(shí)驗(yàn)條件下作用24h,中華鱘、史氏鱘和達(dá)氏鰉的血清IgM可被木瓜蛋白酶酶解,經(jīng)Sephadex G-100分離、純化后獲得了均一性較好的IgFab和IgFc重鏈片段,并經(jīng)免疫印跡法得到驗(yàn)證.SDS-PAGE的結(jié)果表明,3種鱘魚血清的IgFab和IgFc重鏈的相對(duì)分子量相同,分別約為66kDa和4