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1、湖北大學(xué)碩士學(xué)位論文PRDX4與LBP相互作用及其功能的研究姓名:袁冬霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:馬立新20090501AbstractToll—likereceptor(TLRs)recognizepathogen—associatedmolecularpattemsandarecruciallyinvolvedintheregulationofinnateimmuneresponseToll—likere
2、ceptorspromoteproinflammatorysignalingsuchasthenuclearfactor—B,CJunN—terminalkinase(mK),p38,andinterferonpathwaysintheliverandregulateantiviralandantibacterialresponses,hepaticinjuryandwoundhealingInthisresearch,newprote
3、inproteininteractionsinToll—likesignalpathwaywhichwereobtainedbyscreeninglivereDNAlibrarywillbefurthertestedFordetails,thepairofproteinproteininteractionstobestudiedareLBPandPRDX4Severalaspectsmainlyincludedinthisstudyar
4、edescribedasfollows:(1)TheinterestedgenesencodingforLBPandPRDX4wereclonedintothevectorpCDNA31MycgfprespectivelywhilethegenesencodingforLBPandPRDX4wererespectivelyclonedintothevectorpCDNA31Flaggfp。(2)Theinterestedgenesenc
5、odingforLBPandPRDX4wereclonedintothevectorpET23aGSTgfporpET23aHis—gfprespectivelyTheconstructedplasmidspET23a‘GST。LBP,pET23aHisPRDX4,pET23aGST—PRDX4,pET23aHisLBP,weretransformedintoEcoliBL21(DE3)。Thesingleclonewasrespect
6、ivelycultured,andtheculturewasinducedbyadditionofIPTGforexpressionandpurificationoftargetproteins(3)TheinterestedgenesencodingforLBPandPRDX4wereclonedintovectorplEx10respectively。TheconstructedplasmidsplEx—HisLBPandplEx—
7、His—PRDX4weretransfectedintocelllineHEK293respectively,expressionofthesesproteinswasdetectedbywesternblotting(4)ExpressionplasmidspCDNA31Myc—LBP,pCDNA31一FlagPRDX4,pCDNA31Myc—LBPandpCDNA31一FlagPRDX4weretransfectedintocell
8、lineHEK293respectively,expressionofthesesproteinswasdetectedbywesternblotting(5)TheinteractionsofproteinsLBPandPRDX4weretestedbyCO—immunoprecipationItidentifiedthattheinteractionsbetweenLBPandPRDX4(6)Twopairsofprotein—pr
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