櫛孔扇貝大規(guī)模死亡時期體內(nèi)病毒樣粒子的鑒定與蛋白組分的初步分析.pdf

1、2002-2003年扇貝大規(guī)模死亡時期,自青島太平角養(yǎng)殖海區(qū)采集患病櫛孔扇貝樣品.通過蔗糖梯度離心、電鏡負染觀察、SDS-PAGE等方法對病毒的粒子的純化、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)組成等進行了研究.1、通過差速離心和兩次不連續(xù)蔗糖梯度離心成功分離純化櫛孔扇貝病毒樣顆粒.經(jīng)電鏡檢測得知,32.5﹪-35﹪的蔗糖界面處,35﹪-37.5﹪的界面處,以及37.5﹪-40﹪的界面處的乳白色條帶均有病毒分布.通過對病毒的形態(tài)學和結(jié)構(gòu)學比較觀察,依據(jù)病毒的

2、分類學特征,推測:32.5﹪-35﹪界面層含量為82.5﹪的病毒樣粒子為副粘病毒粒子;35﹪-37.5﹪界面層含量為88.5﹪的病毒樣粒子為冠狀病毒粒子.2、通過電鏡負染,SDS-PAGE等技術對櫛孔扇貝中發(fā)現(xiàn)的冠狀樣病毒粒子的超微結(jié)構(gòu)和蛋白組成成分進行了觀察和分析.通過對比其他冠狀病毒的結(jié)構(gòu)和成分分析,初步建立了櫛孔扇貝冠狀病毒粒子的結(jié)構(gòu)模式.確定了兩種內(nèi)部核心結(jié)構(gòu)蛋白成分,參考冠狀病毒科粒子結(jié)構(gòu)蛋白的大小和定位,同時對比幾種已知動物

3、和人冠狀病毒的蛋白分子量,確認分子量為42.5KD的是M蛋白,是構(gòu)成ICS的主要蛋白;另一種分子量為58KD的為核蛋白N.兩種纖突蛋白成分,確認分子量為151KD的是S蛋白,構(gòu)成病毒的長纖突(20mm),另一種是分子量為60KD的HE蛋白.3、通過電鏡負染,SDS-PAGE等技術對櫛孔扇貝中發(fā)現(xiàn)的副粘病毒粒子的超微結(jié)構(gòu)和蛋白組成萬分進行了觀察和分析.通過對比副粘病毒科的其他病毒科的其他病毒粒子的結(jié)構(gòu)和萬分分析,初步探討了櫛孔扇貝副粘病毒