櫛孔扇貝急性病毒性壞死病毒垂直傳播途徑的研究.pdf

1、櫛孔扇貝“急性病毒性壞死病毒”(Acute Viral Necrotic Virus；AVNV)已被證實為是一種對養(yǎng)殖櫛孔扇貝危害極大的病原體，開展其垂直傳播途徑的探索對于養(yǎng)殖生產(chǎn)中的該疾病的預防與控制、健康養(yǎng)殖模式的建立和健康苗種的培育具有重要的理論和實踐意義。鑒于目前櫛孔扇貝苗種主要來源于養(yǎng)殖海區(qū)半人工采苗的野生苗，僅憑櫛孔扇貝繁殖季節(jié)對產(chǎn)卵場AVNV的調查檢測，難以辨別親貝、卵、幼體、稚貝的一一對應關系。于是，本文通過室內(nèi)人工育苗

2、的方法人為控制親本和下一代的對應關系，同時，應用建立的間接酶聯(lián)免疫吸附法對通過室內(nèi)人工育苗得到的樣品和貝類人工育苗場收集的樣品進行大批量的定性檢測，應用電鏡技術和間接免疫熒光技術對櫛孔扇貝的親貝卵巢、卵、受精卵和發(fā)育各期的幼體進行定位檢測，從這兩方面驗證該病毒是否存在垂直傳播途徑。 2006年10月和2007年5月開展了2個批次的室內(nèi)人工育苗，將親貝各放在一獨立育苗水體內(nèi)產(chǎn)卵、孵化，并進行幼體培育。從40個獨立育苗水體中，采獲親

3、貝、卵各23個家系樣品，受精卵、D形幼蟲、殼頂幼蟲各12個家系樣品，眼點幼蟲2個家系樣品。2007年4月3日至20日，從貝類人工育苗場內(nèi)成功采集到櫛孔扇貝親貝、卵、受精卵等各期幼體。 利用已建立的AVNV間接ELISA法檢測體系，對采集到的櫛孔扇貝親貝、卵和各期幼體進行檢測，探討其是否存在垂直傳播的可能性。檢測結果顯示：親貝家系樣品的性腺中可以檢測到病毒，而卵、受精卵、D形幼蟲、殼頂幼蟲、眼點幼蟲的家系樣品中均未檢測到病毒。由此

4、可以判斷，櫛孔扇貝AVNV垂直傳播途徑的可能性不大。 為了進一步證實AVNV間接ELISA法的檢測結果，利用間接免疫熒光技術對攻毒后櫛孔扇貝的親貝卵巢進行檢測。同時利用電鏡技術對發(fā)病疫區(qū)的櫛孔扇貝親貝卵巢和室內(nèi)人工育苗的親貝卵巢以及各期幼體進行觀察。結果發(fā)現(xiàn)：在櫛孔扇貝的生殖腺內(nèi)發(fā)現(xiàn)了病毒，但是病毒的感染部位主要分布在生殖腺小管的外膜中，而卵原細胞是由生殖小管的內(nèi)生殖上皮產(chǎn)生的。由此可以判斷，病毒粒子并不能感染卵細胞。而且在扇貝